《基因工程程序課時(shí)》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 核酸內(nèi)切酶 ,但是必須切出相同黏性末端 。 基因表達(dá)載體的組成： 目的：使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個(gè)體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因文庫。 目的基因的 mRNA 雜交雙鏈 (單鏈 RNA/單鏈 DNA) 單鏈 DNA 反轉(zhuǎn)錄酶 核酸酶 H DNA聚合酶 雙鏈 DNA (目的基因 ) ③ 根據(jù)已知的氨基酸序列合成 DNA法 ： 根據(jù)已知蛋白質(zhì)的氨基酸序列，推測(cè)出相應(yīng)的信使 RNA序列，然后按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，推測(cè)出它的結(jié)構(gòu)基因的核苷酸序列，再通過化學(xué)方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。 基因表達(dá)載體 受體細(xì)胞 一、為什么要有“目的基因的獲取”這一步？ 二、為什么要有“表達(dá)載體的構(gòu)建”這一步？ 有了目的基因，我們才能賦予一種生物以另一種生物的遺傳特性 單獨(dú)的 DNA片段 ──目的基因是不能穩(wěn)定遺傳的。一 、 基因工程的基本操作程序 1． 目的基因的獲取 。 4． 目的基因的檢測(cè)與鑒定 。 ① 鳥槍法： 供體細(xì)胞中的 DNA 許多 DNA片段 運(yùn)載體 限制酶 與載體連接 載入 受體細(xì)胞 產(chǎn)生特定性狀 導(dǎo)入 外源 DNA擴(kuò)增 目的基因 分離 (直接分離法 ) (一 )從基因文庫中獲取目的基因 ② 反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使 RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈 DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過 PCR方式從含有該基因的生物的 DNA中，直接獲得，也可以通過反轉(zhuǎn)錄，用 PCR方式從 mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是： （ 1） 生物之
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