《基因工程制下》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 4 層析一般步驟 ： 處理介質(zhì) ↓ 裝柱 ↓ 平衡 ↓ 上樣 ↓ 洗滌 ↓ 洗脫 ↓ 介質(zhì)再生 3 注意問題 ： (1) 緩沖液的選擇 ： 陽離子： Tris 陰離子：磷酸鹽 ， 檸檬酸鹽 (2) 介質(zhì)處理 ： 陽離子： Na+ 型 陰離子： Cl 型 (3) 洗脫 ： ?原理： i改變鹽濃度 ii改變 pH值 ?方式： i連續(xù)洗脫 ii梯度洗脫 (4) 介質(zhì)再生 非蛋白質(zhì)類雜質(zhì)的去除 ： （ 1） DNA的去除：采用陰離子交換或疏水層析去除 （ 2）去熱源：生產(chǎn)過程中要作到無菌，在低溫下操作，最后產(chǎn)品要通過過濾滅菌。如表達(dá) GMCSF的工程菌，在 30度表達(dá)量最大，而在 37度，由于細(xì)菌熱休克系統(tǒng)被激活，大量的蛋白酶被誘導(dǎo)，導(dǎo)致表達(dá)產(chǎn)物被降解。玉米漿 %，牛肉膏 %，谷氨酸鈉 1%。 ： 可提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性 二、基因工程菌的發(fā)酵工藝 （ 1）培養(yǎng)基的組成 C源：如使用葡萄糖，則要防止對 Lac操縱子的影響。 （ 2）核糖體數(shù)量減少，則減少了氨酰 tRNA的不足，減少了核糖體在肽鏈延長時的停頓和 ppGpp的合成，在較低的比生長速率下達(dá)到平衡。如在大腸桿菌中表達(dá)有攝氧能力的細(xì)菌血紅蛋白（ VHB），可提高菌體的氧攝取能力。 質(zhì)粒穩(wěn)定性的分析方法： 工程菌 涂布不含抗性平板 隨機挑取100個菌落 稀釋 10~12h 接種 含抗性的平板 10~12h 菌落計數(shù) 提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法： 定性 ，如抗生素，也可抑制質(zhì)粒的丟失 有優(yōu)勢，并使工程菌和質(zhì)粒丟失菌生長競爭趨于極端化 第六節(jié) 基因工程菌生長代謝的特點 一、 菌體生長與能量的關(guān)系 ： 菌體生長由呼吸控制，各種碳源通過有限的呼吸能力所能提供的最大能量決定了菌體在培養(yǎng)基中的最大比生長速率 當(dāng)菌體生長所需能量大于菌體有氧代謝所能提供的能量時，菌體常會產(chǎn)生乙酸，乙酸會對菌體的生長起抑制作用。 DNA重組系統(tǒng)的作用： 質(zhì)粒
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