基因工程制下ppt課件-展示頁
2024-09-26 18:24本頁面
【正文】 。玉米漿 %，牛肉膏 %，谷氨酸鈉 1%。 （ 2）以 pET載體、大腸桿菌 BL21(DE3)為例，常用的發(fā)酵培養(yǎng)基有： LB培養(yǎng)基 ：蛋白胨： 10g/L；酵母提取物： 5g/L；NaCl： 10g/L。 ： 可提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性 二、基因工程菌的發(fā)酵工藝 （ 1）培養(yǎng)基的組成 C源：如使用葡萄糖，則要防止對(duì) Lac操縱子的影響。 ： 由于基因工程菌的不穩(wěn)定性，連續(xù)培養(yǎng)很難做到。 （ 2）核糖體數(shù)量減少，則減少了氨酰 tRNA的不足，減少了核糖體在肽鏈延長(zhǎng)時(shí)的停頓和 ppGpp的合成，在較低的比生長(zhǎng)速率下達(dá)到平衡。 在同樣培養(yǎng)基中，工程菌的生長(zhǎng)速度低于其宿主菌的生長(zhǎng)速度，特別是工程菌誘導(dǎo)后外源基因的表達(dá)一起菌體生長(zhǎng)速率下降，甚至停止生長(zhǎng)。如在大腸桿菌中表達(dá)有攝氧能力的細(xì)菌血紅蛋白（ VHB），可提高菌體的氧攝取能力。 采取各種方法，控制菌體的糖酵解速度，使之低于三羧酸循環(huán)和呼吸鏈的最大代謝能力，避免乙酰輔酶 A和乙酸的產(chǎn)生。 質(zhì)粒穩(wěn)定性的分析方法： 工程菌 涂布不含抗性平板 隨機(jī)挑取100個(gè)菌落 稀釋 10~12h 接種 含抗性的平板 10~12h 菌落計(jì)數(shù) 提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法： 定性 ，如抗生素，也可抑制質(zhì)粒的丟失 有優(yōu)勢(shì)，并使工程菌和質(zhì)粒丟失菌生長(zhǎng)競(jìng)爭(zhēng)趨于極端化 第六節(jié) 基因工程菌生長(zhǎng)代謝的特點(diǎn) 一、 菌體生長(zhǎng)與能量的關(guān)系 ： 菌體生長(zhǎng)由呼吸控制，各種碳源通過有限的呼吸能力所能提供的最大能量決定了菌體在培養(yǎng)基中的最大比生長(zhǎng)速率 當(dāng)菌體生長(zhǎng)所需能量大于菌體有氧代謝所能提供的能量時(shí)，菌體常會(huì)產(chǎn)生乙酸，乙酸會(huì)對(duì)菌體的生長(zhǎng)起抑制作用。 菌的頻率大，增加拷貝數(shù)能提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性 菌的頻率較低，但大量外源質(zhì)粒的存在使含質(zhì)粒菌的比生長(zhǎng)速率明顯低于不含質(zhì)粒菌，而不含質(zhì)粒菌一旦產(chǎn)生，能較快取代含質(zhì)粒菌而成為優(yōu)勢(shì)菌，所以對(duì)這類菌不能簡(jiǎn)單地采取提高質(zhì)粒拷貝數(shù)的方法。 DNA重組系統(tǒng)的作用： 質(zhì)粒載體之間發(fā)生重組會(huì)形成二聚體、三聚體，甚至四聚體等所謂的質(zhì)粒寡聚體，其穩(wěn)定性比單體差。第五節(jié) 基因工程菌的穩(wěn)定性 基因工程菌在 傳代 過程中會(huì)出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定現(xiàn)象，包括 分裂不穩(wěn)定 和 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定 。 質(zhì)粒不穩(wěn)定產(chǎn)生的原因：
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