基因工程制下ppt課件(已修改)
2025-09-23 18:24 本頁面
【正文】 第五節(jié) 基因工程菌的穩(wěn)定性 基因工程菌在 傳代 過程中會出現(xiàn)質(zhì)粒不穩(wěn)定現(xiàn)象，包括 分裂不穩(wěn)定 和 結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定 。 質(zhì)粒不穩(wěn)定產(chǎn)生的原因： 3. 細(xì)胞中所含質(zhì)粒載體的拷貝數(shù)： 拷貝數(shù)差別不大時，質(zhì)粒載體相對地穩(wěn)定；拷貝數(shù)相差懸殊，則很容易造成一些細(xì)胞丟失質(zhì)粒，并逐漸發(fā)展為優(yōu)勢群體。 DNA重組系統(tǒng)的作用： 質(zhì)粒載體之間發(fā)生重組會形成二聚體、三聚體，甚至四聚體等所謂的質(zhì)粒寡聚體，其穩(wěn)定性比單體差。質(zhì)粒載體中外源 DNA片段的大小同質(zhì)粒寡聚化的程度也密切相關(guān) ，還與培養(yǎng)條件有關(guān)。 菌的頻率大，增加拷貝數(shù)能提高質(zhì)粒的穩(wěn)定性 菌的頻率較低，但大量外源質(zhì)粒的存在使含質(zhì)粒菌的比生長速率明顯低于不含質(zhì)粒菌，而不含質(zhì)粒菌一旦產(chǎn)生，能較快取代含質(zhì)粒菌而成為優(yōu)勢菌，所以對這類菌不能簡單地采取提高質(zhì)?？截悢?shù)的方法。 高拷貝質(zhì)粒菌中質(zhì)?？截悢?shù)增加與產(chǎn)物增加往往不成正比，這可能是含高拷貝質(zhì)粒菌中，蛋白合成的限速步驟是轉(zhuǎn)錄和翻譯，基因的大量復(fù)制加重了轉(zhuǎn)錄和翻譯的負(fù)擔(dān)，使得蛋白質(zhì)合成速度變慢。 質(zhì)粒穩(wěn)定性的分析方法： 工程菌 涂布不含抗性平板 隨機(jī)挑取100個菌落 稀釋 10~12h 接種 含抗性的平板 10~12h 菌落計數(shù) 提高質(zhì)粒穩(wěn)定性的方法： 定性 ，如抗生素，也可抑制質(zhì)粒的丟失 有優(yōu)勢，并使工程菌和質(zhì)粒丟失菌生長競爭趨于極端化 第六節(jié) 基因工程菌生長代謝的特點 一、 菌體生長與能量的關(guān)系 ： 菌體生長由呼吸控制，各種碳源通過有限的呼吸能力所能提供的最大能量決定了菌體在培養(yǎng)基中的最大比生長速率 當(dāng)菌體生長所需能量大于菌體有氧代謝所能提供的能量時，菌體常會產(chǎn)生乙酸，乙酸會對菌體的生長起抑制作用。乙酸的產(chǎn)生是因為供能不足，菌體將乙酰輔酶 A轉(zhuǎn)變?yōu)橐阴砉┠堋? 采取各種方法，控制菌體的糖酵解速度，使之低于三羧酸循環(huán)和呼吸鏈的最大代謝能力，避免乙酰輔酶 A和乙酸的產(chǎn)生。 通過代謝工程，提高菌體攝氧能力，可減少乙酸的生成。如在大腸桿菌中表達(dá)有攝氧能力的細(xì)菌血紅蛋白（ VHB），可提高菌體的氧攝取能力。 減少乙酸的方法： 二、 菌體生長與前體供應(yīng)的關(guān)系 在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入氨基酸能使菌體比生長速率提高，蛋白合成增加。 在同樣培養(yǎng)基中，工程菌
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