基因工程制下ppt課件(參考版)
2024-09-22 18:24本頁面
【正文】 。 （ 6）殘余外源性 DNA測定：探針雜交，應(yīng)低于 100pg （ 7）殘余血清 IgG含量測定 （ 8）殘余抗生素活性測定 （ 9）紫外光譜掃描：最大吸收峰應(yīng)為 280+2nm （ 10）肽圖測定：用 CNBr裂解法 （ 12）等電點測定：用等電聚焦法 成品檢定 （ 1）物理形狀：凍干制品為白色或為黃色疏松體，加水后不含有肉眼可見的不溶物。 （ 4）純度測定：非還原型 SDSPAGE,銀染為單一條帶，掃描儀測定純度 95%；HPLC測定呈一個吸收峰，或主峰占峰總面積的 95%以上。 五、產(chǎn)品的保存 ：制成干粉或結(jié)晶，在干燥器中 4度可長期保存。 ①低溫保存 ②在穩(wěn)定 pH下保存 ③高濃度保存：濃度高，蛋白質(zhì)比較穩(wěn)定。 體內(nèi)測定：建立合適的動物模型 體外測定：細(xì)胞培養(yǎng)計數(shù)法、 3HT α R摻入法等。此外，需要測定重組蛋白的抗原性，防止其過強的免疫原性誘發(fā)體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)造成傷害。 ② 非蛋白類雜質(zhì) ：包括病毒、細(xì)菌、熱原、內(nèi)毒素、致敏原、DNA等。 （ 2） 雜質(zhì) ：包括蛋白和非蛋白雜質(zhì) ① 蛋白類雜質(zhì) ： 包括宿主細(xì)胞蛋白和目的蛋白自身由于降解、聚合、錯誤折疊而造成的蛋白變構(gòu)體。thrich）（瑞士蘇黎士聯(lián)邦理工學(xué)院）教授的貢獻(xiàn)是把核磁共振（ NMR）分析方法應(yīng)用到了生物大分子 (蛋白質(zhì)和核酸 )的結(jié)構(gòu)研究中，建立了一套完整的確定生物大分子空間結(jié)構(gòu)的方法。 ② 高級結(jié)構(gòu)分析 ： X射線衍射及核磁共振。存在鏈間二硫鍵的分子在還原的 SDSPAGE 中被還原 ,分子變?yōu)樾〉碾逆湺^在非還原的 SDSPAGE 中泳動快。而存在鏈間二硫鍵的分子由于第二向電泳時被還原 ,分子變成小的肽鏈而位于對角線的下方。 ② 雙向?qū)蔷€ SDSPAGE：既無鏈內(nèi)又無鏈間二硫鍵的分子位于對角線上 (兩向電泳中分子遷移率相等 ) 。 （ 5） 重組蛋白相對分子量的測定 ：分子篩法、 SDSPAGE法、質(zhì)譜法。 （ 3） 部分氨基酸序列分析 ：測定 N端 15個氨基酸，作為重組蛋白質(zhì)和多肽的重要鑒定指標(biāo)。 （ 2） 氨基酸成分分析 ：蛋白質(zhì)在酸性或堿性條件下水解后，用氨基酸分析儀進行組成分析。 ： （ 1） 肽圖分析 ：用酶法或化學(xué)法降解目的蛋白質(zhì)，對生成的肽段進行分離分析。 三、 純化工藝過程的質(zhì)量控制
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