《基因工程的概念》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 1）指示外源 DNA分子（載體或重組分子） 是否進(jìn)入宿主細(xì)胞 這種指示可以是選擇性的（ Ampr ， Tetr ， Kanr），也可以是非選擇性的（如 lacZ） 2）指示外源 DNA分子 是否插入載體分子 形成了重組子。 至少應(yīng)有一個(gè)克隆位點(diǎn)，以供外源 DNA插入。 Vectors 二、質(zhì)粒 DNA的分離與純化 Vectors 三、質(zhì)粒載體的構(gòu)建及類型 ? （一）質(zhì)粒載體的發(fā)展概況； ? （二）質(zhì)粒載體的特點(diǎn)（基本條件）； ? （三）遺傳標(biāo)記基因 ? （四）質(zhì)粒載體的類型 Vectors （一）發(fā)展概況 1. 第一階段（ 1977年前）：天然質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的利用，如 pSC101, colE1, pCR, pBR313和 pBR322 (1977, Bolivar et al) 2. 第二階段：增大載體容量（降低載體長度），建立多克隆位點(diǎn)區(qū)和新的遺傳標(biāo)記基因。因此，作為載體的質(zhì)粒應(yīng)該是松弛型的。 質(zhì)粒 DNA不僅能在細(xì)菌中復(fù)制，并且在添加真核復(fù)制信號和啟動子后，可以構(gòu)建出能在原核和真核細(xì)胞中均可復(fù)制的穿梭質(zhì)粒，并在真核細(xì)胞中表達(dá)，因此這類載體在基因工程中應(yīng)用廣泛。 Polymerase Chain Reaction ? Denaturation （ 變性 ） : The target DNA (template) is separated into two stands by heating to 95℃ ? Primer annealing （ 引物退火 ） : The temperature is reduced to around 55℃ to allow the primers to anneal. ? Polymerization (elongation, extension): The temperature is increased to 72℃ for optimal polymerization step which uses up dNTPs and required Mg++ Polymerase Chain Reaction Vectors ? 一、質(zhì)粒的一般生物學(xué)特性； ? 二、質(zhì)粒 DNA的分離與純化； ? 三、質(zhì)粒載體的構(gòu)建及類型； ? 四、常用質(zhì)粒載體舉例； 一、質(zhì)粒的一般生物學(xué)特性 （一）、質(zhì)粒 DNA 質(zhì)粒是細(xì)菌染色體外能夠自主復(fù)制的環(huán)形雙鏈的 DNA分子。 5. 均為單體，分子量為 47— 108 kD。 CTCGAG 基因工程中的工具酶 （四）、異源同序酶（ isoschizomer，同裂酶） 1. 定義 ：能識別相同序列但來源不同的兩種或多種限制酶 2. 特點(diǎn) ： 1）識別相同順序 2）切割位點(diǎn)的異同 KpnI GGTAC C Asp718 G GTACC SstI CCGC GG SacI CCGC GG 基因工程中的工具酶 （五）、 限制酶的用途 1. DNA重組 2. 限制酶（物理）圖譜繪制 3. 突變分析（ RFLP分析） 4. 限制酶的部分酶切與完全酶切 附： IIS型限制酶的特點(diǎn) 1. 具有特異型核苷酸順序識別能力，但該順序不具有對稱結(jié)構(gòu)。 EcoRI— Escherichia coli RI 基因工程中的工具酶 （三）、限制酶的特點(diǎn) 1. 識別順序和酶切位點(diǎn) １）識別４ 8個(gè)相連的核苷酸 MboI NGATCN； AvaII GG(A/T)CC BamHI GGATCC： PpuMI PuGG(A/T)CCPy Not I GCGGCCGC； SfiI GGCC N N N N N GGCC CCGGN’N’N’N’N’CCGG ２ ） 富含ＧＣ ３）對稱性 — 雙對稱 EcoRI 5’G A A T T C3’ 3’C T T A A G5’ ４）切點(diǎn)大多數(shù)在識別順序之內(nèi)，也有例外 ５）限制酶切后產(chǎn)生兩個(gè)末端，末端結(jié)構(gòu)是５ ’ Ｐ和３ ’ ＯＨ 基因工程中的工具酶 2. 末端種類 １）３ ’ 端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸 Pst I 5’CTGCAG3’ 5’CTGCA G3’ 3’GACGTC5’ 3’G ACGTC5’ ２）５ ’ 端突起，個(gè)數(shù)為２或４個(gè)核苷酸 EcoRI 5’GAATTC3’ 5’GOH PAATTC3’ 3’CTTAAG5’ 3’CTTAAP HOG5’ 粘性末端能與另一個(gè)相同的粘連末端相連接，任何兩個(gè)具有相同識別 位點(diǎn)的 DNA分子經(jīng)限制酶切割后能夠重新連接成新的重組 DNA分子。 上述三個(gè)系統(tǒng)中，只有 II型限制酶與甲基化酶具有相當(dāng)高的核苷酸識別特異性，因而被廣泛用于基因工程中。 基因工程的概念 三、 基因工程的應(yīng)用 ? 醫(yī)藥 ： 生物制藥；基因治療；人工器官 ? 農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè) 轉(zhuǎn)基因植物 ：抗病蟲害新品種、抗逆新品種、 高品 質(zhì)新品種 轉(zhuǎn)基因動物 ：生產(chǎn)有用蛋白質(zhì)和高品質(zhì)的畜產(chǎn)品 生物反應(yīng)器 ：利用動植物細(xì)胞或組織作為生物反應(yīng)器， 直接生產(chǎn)有用蛋白質(zhì) ? 輕工與食品 新型食品；營養(yǎng)食品；保健食品；輕工用酶 ? 環(huán)境 污染治理；廢物利用；污染物生物降解 基因工程的概念 供體細(xì)胞目的基因載體重組D N A 分子轉(zhuǎn)化細(xì)胞受體細(xì)胞多肽藥物疫苗、抗體基因治療基因診斷 轉(zhuǎn)基因動物( 畜牧業(yè)、漁業(yè) 生物反應(yīng)器)轉(zhuǎn)基因植物( 農(nóng)業(yè)、林業(yè) 生物反應(yīng)器)冶金、環(huán)保輕工、食品 基因工程的概念 轉(zhuǎn)基因植物
語文相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1