《基因工程dna誘變》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 標(biāo)記獲救 ”現(xiàn)象，即產(chǎn)生帶野生型基因組的噬菌體。rebination， RPR)RPR以單鏈 DNA為模板，配合一套隨機(jī)序列引物，先產(chǎn)生大量互補(bǔ)于模板不同位點(diǎn)的短 DNA片段，由于堿基的錯配和錯誤引發(fā)，這些短 DNA片段中也會有少量的點(diǎn)突變，在隨后的 PCR反應(yīng)中，它們互為引物進(jìn)行合成，伴隨組合，再組裝成完整的基因長度。三、隨機(jī)引發(fā)重組(random② 通過多輪篩選或選擇，可以使有益突變迅速積累，導(dǎo)致功能的明顯提高； ③ 從表型上早期進(jìn)行選擇，而不必了解 DNA片段上序列的信息，簡化了操作程序； ④ 比隨機(jī)突變顯著提高了良性突變的概率。DNA一、 DNA洗牌法 （ DNAPCR）或分子育種 PCR（ molecular是一種呼吸抑制劑，能引起基因突變，可獲得較高的突變頻率，而且無殘毒。為腺嘌呤（ A）的類似物馬來酰肼（ MH） 烷化劑作用機(jī)制 —— 作用重點(diǎn)是核酸，導(dǎo)致 DNA斷裂、缺失或修補(bǔ)。亞硝基烷基化合物 —— 亞硝基乙基脲（ NEH）、 N亞硝基 N乙基脲烷（ NEU）3.四、化學(xué)誘變用化學(xué)誘變劑處理雙鏈 DNA片段，將發(fā)生隨機(jī)突變的片段群體克隆到合適的宿主中，構(gòu)建成一個重組突變體庫。三、增變菌株的誘變作用概念： 與 DNA錯配校正功能和 DNA損傷修復(fù)有關(guān)的基因突變后，細(xì)胞內(nèi)基因的突變頻率大大增加，這樣的菌株叫 增變菌株（mutator使用突變 DNA聚合酶，如 Mutazyme。增加聚合酶量到 5U，促使在錯配堿基處繼續(xù)延伸反應(yīng)；?易錯 PCR采用的方法：?一、錯誤摻入突變概念： 在體外 DNA擴(kuò)增中，使用具有錯配傾向的 DNA聚合酶以及反應(yīng)條件，使堿基錯誤摻入到新合成的基因中，又稱易錯PCR（ errorprone體外誘變： 對克隆化的 DNA進(jìn)行誘變處理，改變其核苷酸序列，從而獲得突變基因，用于基因工程、蛋白質(zhì)工程等研究。第十章 經(jīng)典方法： 分離自發(fā)突變體或用物理、化學(xué)誘變劑處理活體來獲得突變，再根據(jù)突變體的表型，采用遺傳學(xué)方法鑒定相應(yīng)基因。定向進(jìn)化： 對于某些實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，一次突變很難獲得滿意的結(jié)果，通常采用反復(fù)多次誘變和循環(huán)，其目的是獲得滿足人們需要的性能改良的蛋白質(zhì)，又稱為 試管進(jìn)化 。PCR的實(shí)質(zhì)： 通過改變 PCR反應(yīng)條件來調(diào)整 PCR反應(yīng)中突變的頻率，降低聚合酶固有的突變序列傾向性，提高突變譜的多樣性，使得錯誤堿基隨機(jī)地以一定的頻率摻入到擴(kuò)增的基因中，從而得到隨機(jī)突變的 DNA群體，最后用合適的載體克
研究報告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1