基因工程載體ppt課件(2)-展示頁
2024-09-26 18:25本頁面
【正文】 olivar和 R. L. Rodriguez， 322為編號。 第三階段：完善載體功能以滿足基因工程克隆中的不同要求，如 M13mp系列載體，含 T3， T7， sp6啟動子載體，表達型載體及各種探針型載體。 三、質(zhì)粒載體的構(gòu)建 第一階段（ 1977年前）：天然質(zhì)粒和重組質(zhì)粒的利用，如 pSC101, colE1, pCR, pBR313和 pBR322。 Col質(zhì)?；?R質(zhì)粒如果帶有轉(zhuǎn)移基因，也可以成為接合型質(zhì)粒。 帶有控制 大腸桿菌素（ colicin） 合成的基因。 （ 1） R質(zhì)粒（抗性質(zhì)粒）： 帶有一種或數(shù)種 抗生素抗性基因 ，使寄主獲得同樣的抗生素抗性性狀（ resistance）。 1. 接合型質(zhì)粒： 不符合基因工程的安全要求。 SC OC L 二、質(zhì)粒的類型 在大腸桿菌中的質(zhì)粒，可以分為： 接合型質(zhì)粒 （ conjugative plasmid) 非接合型質(zhì)粒 （ nonconjugative plasmid) 能自我轉(zhuǎn)移 不能自我轉(zhuǎn)移 除了帶有自我 復(fù)制 所必需的遺傳信息外還帶有一套控制細菌 配對 和質(zhì)粒 接合轉(zhuǎn)移 的基因。 1. 質(zhì)粒的一般生物學(xué)特性 （ 4）質(zhì)粒的空間構(gòu)型： ① 共價閉合環(huán)狀 DNA（ cccDNA) 呈超螺旋（ SC）（ super coil） Covalent close circular DNA ③ 線形 DNA （ linear ， lDNA） 一條鏈上有一至數(shù)個缺口。 （酵母的“殺傷質(zhì)?！笔?RNA）。 （ 1）分子量?。? 1— 200 kb （ 2） 編碼基因少： 2— 3個中等大小的蛋白質(zhì)。 第一節(jié) 質(zhì)粒載體 一、質(zhì)粒（ plasmid） 是獨立于染色體以外的能自主復(fù)制的雙鏈閉合環(huán)狀 DNA分子。 按功能 : 克隆載體和表達載體。 （ 4）分子量小，拷貝數(shù)多。 （ 3）有一段多克隆位點。 T vector的克隆過程 T vector PCR product T4 DNA ligase T T （ 1）在宿主細胞內(nèi)能獨立復(fù)制。第二章 基因工程載體 vectors 1. 基因工程載體的概念 把一個有用的基因（目的基因 —— 研究或應(yīng)用基因）通過基因工程手段送到生物細胞（受體細胞），需要運載工具（交通工具）攜帶外源基因進入受體細胞，這種運載工具就叫載體。 作為基因工程載體，質(zhì)粒至少應(yīng)該具備 復(fù)制的起始區(qū)、選擇標(biāo)記基因區(qū)、多克隆位點等部分。 （ 2）有選擇性標(biāo)記。 2. 基因工程對載體的要求 外源 DNA插入其中不影響載體的復(fù)制。 3. 載體的種類 按工作方式 : 質(zhì)粒載體、噬菌體載體。 按受體細胞 : 原核細胞（大腸桿菌的克隆載體）和真核細胞的克隆載體。 存在于細菌、霉菌、藍藻、酵母等細胞中。 （ 3）環(huán)形狀： 雙鏈環(huán)狀 DNA。 如抗菌素抗性、代謝特征等，賦予細菌一些額外的特性（非必須）。 ② 開 環(huán) DNA（ open circular， ocDNA） （ 5）質(zhì)粒空間構(gòu)型與電泳速率 同一質(zhì)粒盡管分子量相同，不同的構(gòu)型電泳遷移率不同： scDNA最快、 l DNA次之、 ocDNA最慢。 如： F質(zhì)粒（性質(zhì)粒、或 F因子）： 又叫 自我轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒 。 大腸桿菌接合（ conjunction） 2. 非接合型質(zhì)粒： 雖然帶有自我 復(fù)制 所必需的遺傳信息，但失去了控制細菌配對和質(zhì)粒接合 轉(zhuǎn)移 的基因，因此不能從一個細胞轉(zhuǎn)移到另一個細胞。 符合基因工程的安全要求。 （ 2） Col質(zhì)粒： 大腸桿菌素對不帶 Col質(zhì)粒的大腸桿菌有毒。 三、質(zhì)粒的不相容性 (inpatibility,又稱質(zhì)粒的不親和性 ) 在沒有選擇壓力的情況下，兩種親緣關(guān)系密切的不同質(zhì)粒，不能夠在同一個寄主細胞系中穩(wěn)定共存，這一現(xiàn)象稱為 質(zhì)粒的不相容性 ,又稱質(zhì)粒的不親和性。 第二階段：增大載體容量 (降低載體長度 )，建立多克隆位點區(qū)和新的遺傳標(biāo)記基因 ,如 pUC系列載體。 三、質(zhì)粒載體的構(gòu)建 2. 質(zhì)粒的命名
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