基因工程制藥ppt課件(2)-展示頁
2025-01-14 09:17本頁面
【正文】 n n e c e s s a r y f o r r e p l i c a t i o nt a c p r o m o t e r 1 0P r o m o t e r 1 0t a c p r o m o t e r 3 5P r o m o t e r 3 5A v a I ( 9 4 0 )Ba m H I ( 93 5 )Ec o R I ( 94 5 )P s t I ( 1 90 6)S m a I ( 9 4 2 )X m a I ( 9 4 0 )A p a L I ( 1 9 )A p a L I ( 1 4 7 6 )A p a L I ( 2 7 2 2 )A p a L I ( 3 6 3 2 )1. 有效的表達(dá)載體 (1) 載體的復(fù)制 松弛型的載體可增加基因的拷貝數(shù)，有利于外源基因表達(dá)。 缺點(diǎn)： 生長(zhǎng)速度慢，培養(yǎng)條件苛刻，成本高。 （ 4）哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng) 以中國(guó)倉鼠卵巢細(xì)胞（ CHO） 和非洲綠猴腎細(xì)胞（ COS） 細(xì)胞使用最多。 常用載體： 非分泌載體（ pAO81 pPIC3K、 pPICZ等） 分泌型載體（ pPIC9K、 pPICZα等） （ 2）絲狀真菌 近年來在 30種以上 絲狀真菌中建立了 DNA轉(zhuǎn)化體系 。 雜蛋白較少，產(chǎn)物純化容易。 畢赤酵母的特點(diǎn)： 為真核表達(dá)體系，可進(jìn)行翻譯后修飾； 表達(dá)量高，明膠的表達(dá)量可達(dá) 。 以往多采用 釀酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae） 作為表達(dá)系統(tǒng)，近年來采用 畢赤酵母（ Pichia pastoris） 表達(dá)蛋白增多。 ? 真核表達(dá)系統(tǒng) （ 1）酵母 單細(xì)胞生物，無毒，易培養(yǎng)，繁殖快。 （ 3）鏈霉菌 優(yōu)點(diǎn)： 對(duì)人畜基本無致病性； 已發(fā)展了一大批有實(shí)用價(jià)值的載體質(zhì)粒； 鏈霉菌的模式菌株天藍(lán)色鏈霉菌的基因組測(cè)序已完成； 具有很強(qiáng)的外分泌能力； 表達(dá)蛋白基本能正確折疊，不形成包含體； 具有糖基化功能 為重要的工業(yè)微生物，下游培養(yǎng)工藝成熟。 （ 2）枯草芽孢桿菌 革蘭氏陽性菌，其基因組測(cè)序已經(jīng)完成。 革蘭氏陰性菌 優(yōu)勢(shì)： 遺傳背景清楚，基因組序列已確定； 生長(zhǎng)迅速，平均 20~30min繁殖一代； 易于培養(yǎng)，生產(chǎn)成本低，適合大規(guī)模培養(yǎng)； 外源基因表達(dá)水平高，可達(dá)總蛋白的 5~30％以上； 有大量可供選擇利用的克隆和高效表達(dá)載體。 其他條件： 容易獲得較高濃度的細(xì)胞； 產(chǎn)物的產(chǎn)量、產(chǎn)率高； 能利用易得廉價(jià)原料； 不致病、不產(chǎn)生內(nèi)毒素； 容易進(jìn)行 DNA重組技術(shù)操作； 產(chǎn)物容易提取純化。 基因表達(dá) 基因表達(dá)： 結(jié)構(gòu)基因在生物體中的轉(zhuǎn)錄、翻譯及所有的加工過程。 原核：以基因組為模板 反轉(zhuǎn)錄 PCR（ RTPCR）： 提取 mRNA， 反轉(zhuǎn)錄生成cDNA作為模板進(jìn)行 PCR擴(kuò)增獲得目的基因。 基因工程藥物生產(chǎn)的過程 目的基因的獲得 基因的表達(dá)
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