基因工程ppt課件-展示頁
2024-09-26 18:26本頁面
【正文】 (3) 分離 DNA 9 2. cDNA的分離與純化 （ 1）總 RNA 的提取 ? RNase，不需輔助因子，耐酸堿，分布極廣 ? RNase的來源 外源：操作者，實驗器皿，試劑，空氣 內(nèi)源：不同組織和細(xì)胞數(shù)量不同 ? 創(chuàng)造無 RNase的環(huán)境 — DEPC(焦碳酸二乙酯 )（配成 %的 DEPC 水） — 異硫氰酸胍 ? Trizol試劑 10 逆轉(zhuǎn)錄過程中 cDNA的合成 依賴 RNA的DNA聚合酶 核糖核酸酶H活力 依賴 DNA的DNA聚合酶 11 Trizol試劑 Trizol的主要成分是 苯酚 。 ? 總的原則 : 保證一級結(jié)構(gòu)的完整性 。 7 1. 基因組 DNA的分離與純化 ? DNA主要存在于細(xì)胞核的染色體中。 6 第二節(jié) 核酸的提取及檢測 ? 就基因工程而言，核酸分子是其研究所涉及的主要對象，所以 核酸的分離與提取 是研究中很重要的基本技術(shù)。 4 基因工程的操作過程 酶切 連接 轉(zhuǎn)化 擴增 檢測 目的基因的獲取 克隆載體的構(gòu)建 外源基因與載體的連接 （ 體外重組） 重組 DNA導(dǎo)入受體菌 轉(zhuǎn)化子的篩選和鑒定 克隆基因的表達(dá) 5 目的 基因的克隆： ? 基因工程或 DNA重組技術(shù)的前提條件是從生物體中分離克隆目的基因。1 第七章 基因工程 (gene engineering) 2 重組 DNA醫(yī)藥產(chǎn)品 產(chǎn) 品 功 能 組織胞漿素原激活劑 抗凝 血液因子 VIII 促進(jìn)凝血 顆粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞集落剌激因子 剌激白細(xì)胞生成 促紅細(xì)胞生成素 剌激白細(xì)胞生成 生長因子 (bFGF, EGF) 刺激細(xì)胞生長與分化 生長素 治療侏儒癥 胰島素 治療糖尿病 干擾素 (? 1b, ?2a, ? 2b, ?) 抗病毒感染及某些腫瘤 白細(xì)胞介素 激活、剌激各類白細(xì)胞 超氧化物歧化酶 抗組織損傷 單克隆抗體 診斷試驗、腫瘤導(dǎo)向治療 乙肝疫苗 (CHO, 酵母 ) 預(yù)防乙肝 口服重組 B亞單位菌體霍亂菌苗 預(yù)防霍亂 3 第一節(jié) 重組 DNA技術(shù)的原理 ? 重組 DNA技術(shù)是指將一種生物體 （供體） 的基因與 載體 在 體外 進(jìn)行拼接重組，然后轉(zhuǎn)入另一種生物體 （受體） 內(nèi)，使之 按照人們的意愿 穩(wěn)定遺傳并表達(dá)出新產(chǎn)物或新性狀的 DNA體外操作過程。 ? 也稱為 分子克隆技術(shù) , 基因克隆或基因工程 ? 供體 、 受體 、 載體 是重組 DNA技術(shù)的三大基本元素。 ? 一般來說，目的基因的克隆戰(zhàn)略分為兩大類： 一類是構(gòu)建感興趣的生物個體的基因文庫 ，即將某生物體的全基因組分段克隆，然后建立合適的篩選模型從基因組文庫中挑出含有目的基因的重組克??； 另一類是利用 PCR擴增技術(shù)甚至化學(xué)合成法體外直接合成目的基因 ，然后將之克隆表達(dá)。 ? 核酸樣品的質(zhì)量將直接關(guān)系到實驗的成敗。 ? 核外也有少量 DNA，如線粒體 DNA（ mtDNA），葉綠體 DNA（ cpDNA）， 質(zhì)粒 DNA。 排除其它分子的污染 。 苯酚的主要作用是裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。 12 ※ %的 8羥基喹啉 可以 抑制 RNa
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