基因工程載體ppt課件(2)(編輯修改稿)
2024-10-08 18:25 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 深藍(lán)色 的物質(zhì) 5溴 4氯靛藍(lán)。 Xgal 半乳糖 5溴 4氯靛藍(lán) ?半乳糖苷酶 ② ?半乳糖苷酶 Xgal顯色反應(yīng)： ③ lacZ的 ?肽互補(bǔ) 1） ?肽（ lacZ’ ）： ?半乳糖苷酶 N端的一段氨基酸片斷（ 1141氨基酸）。 lacZ只有在 4聚體的狀態(tài)下才有功能 . C端大部分 N端的 1141aa C端大部分 N端的 1141aa C端大部分 N端的 1141aa C端大部分 N端的 1141aa 4聚體 2）受體菌 lacZ突變（ lacZ?M15） 受體菌基因組的 ?半乳糖苷酶基因的氨基端有缺失（缺失 ?肽），不能形成 4聚體的活性酶，不能分解 Xgal 。 受體菌株： JM系列 、 TG TG XL1blue、 XS12 XS10 KK218MV118 DH5a pUC質(zhì)粒載體上的 lacZ’ 編碼 ?肽與這個(gè)缺失突變的 ?半乳糖苷酶“互補(bǔ)”，使它能形成 4聚體。又能分解 Xgal。產(chǎn)生藍(lán)色物質(zhì)。 C端大部分 N端的 1141aa pUC lacZ’ 受體菌 lacZ? 3）載體 lacZ’與 ?互補(bǔ) 4） ?互補(bǔ)的插入失活 pUC載體上 LacZ’的 5‘端有一段多克隆位 點(diǎn) (MCS)區(qū)，本身雖不干擾 LacZ’的合成， 但插入外源基因就會(huì)阻止 LacZ’的合成。不 能互補(bǔ)。 lacZ’ 5’ 3’ ?肽移碼突變 lacZ’ 5’ 3’ ?肽 不互補(bǔ) 互補(bǔ) MCS 外源 DNA ④ IPTG的誘導(dǎo)作用 IPTG是乳糖的類似物。能誘導(dǎo) lac操縱子的啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，使受體菌基因組中的 lacZ 的 C端部分 和載體的 lacZ’?肽 都表達(dá)。從而互補(bǔ)。 但載體 MCS上插入外源 DNA后，仍然不能產(chǎn)生 ?肽！ IPTG 通過(guò)看培養(yǎng)皿上的菌斑的顏色就能直接知道是否有 DNA插入。 MCS無(wú)插入時(shí)，互補(bǔ)，藍(lán)菌斑。 MCS有插入時(shí)，不互補(bǔ)，白菌斑。 IPTG誘導(dǎo)的結(jié)果： 無(wú)質(zhì)粒的 受體菌 ?半乳糖苷酶部分缺失，不能分解 Xgal；無(wú)抗菌素抗性 在含抗菌素和 Xgal的培養(yǎng)基上培養(yǎng) 無(wú)菌斑生長(zhǎng) 質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的受體菌 ?半乳糖苷酶的缺失被載體產(chǎn)物?互補(bǔ)，能分解Xgal。且有抗菌素抗性 在含抗菌素和 Xgal的培養(yǎng)基上培養(yǎng) 有藍(lán)色菌斑生長(zhǎng) 帶外源 DNA插入的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的受體菌 載體產(chǎn)物失活，不能互補(bǔ) ?半乳糖苷酶的缺失。不能分解Xgal，但有抗菌素抗性 在含抗菌素和 Xgal的培養(yǎng)基上培養(yǎng) 有白色菌斑生長(zhǎng) （ 5） pUC系列載體的優(yōu)點(diǎn) ① 更小的分子量： 如 pUC18為 2682bp， pUC8為 2750bp。 ② 選擇方便 Xgal顯色、抗菌素雙重直接選擇。 ③ 克隆便利 具有多克隆位點(diǎn)（ MCS），使有兩個(gè)不同粘性末端的外源 DNA方便地插入。 ④ 測(cè)序方便 第二節(jié) 噬菌體載體 （ Bacteriophage，簡(jiǎn)稱 phage） T4 Bacteriophage 一、 噬菌體的一般生物特性 可脫離寄主細(xì)胞生存，但不能進(jìn)行復(fù)制。 除了對(duì)寄主的依賴性，還具備其它的功能： 保護(hù)自己的核苷酸分子（ DNA、 RNA）免遭環(huán)境化學(xué)物質(zhì)的破壞； 將其核苷酸分子注入到被感染的細(xì)菌細(xì)胞； 將被感染的細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)變成制造噬菌體的體系，從而長(zhǎng)生出大量的子代噬菌體顆粒； 使感染的細(xì)菌細(xì)胞釋放出子代的噬菌體顆粒 1. 噬菌體的結(jié)構(gòu)和其核酸類型 ： 結(jié)構(gòu)： 無(wú)尾部結(jié)構(gòu)的二十面體型、 具尾部結(jié)構(gòu)的二十面體型、 線狀體型 核酸類型：最常見(jiàn)的是雙鏈線性 DNA、 雙鏈環(huán)形 DNA、
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