【正文】 液—10%單寧酸10ml+5ml飽和硫酸鉀鋁水溶液+1ml苯胺飽和水溶液+5%氯化鐵水溶液成墨色。革蘭染色法：初染（草酸銨結(jié)晶紫）、媒染（碘液）、脫色（95%酒精）、復(fù)染（番紅）。27. 超凈工作臺(tái)應(yīng)采用層流技術(shù)凈化空氣、選擇垂直氣流通風(fēng)方式。質(zhì)粒載體具有特點(diǎn)：復(fù)制起點(diǎn)、抗菌素抗性基因、多種限制酶的單一切點(diǎn)、較高的拷貝數(shù)：只含一種核酸基因組復(fù)制缺乏完整的酶系統(tǒng)RNA病毒的RNA經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成互補(bǔ)DNA（CDNA）。25. 細(xì)菌遺傳物質(zhì)主要在于染色體、質(zhì)粒和轉(zhuǎn)位因子中。22. 紫外線波長265～266nm時(shí)殺菌力最強(qiáng)。G菌細(xì)胞壁的主要成份：肽聚糖、脂蛋白、外膜、脂多糖（LPS）（類脂A、核心多糖、特異性多糖），菌體脂多糖（LPS）能引起發(fā)熱故稱熱原質(zhì)，又稱為細(xì)菌的內(nèi)毒素。IgG和IgM能在血中直接中和病毒。內(nèi)毒素（G脂質(zhì)A）、外毒素（G+產(chǎn)生的毒性蛋白質(zhì)產(chǎn)物，具有抗原性強(qiáng)、毒性強(qiáng)、作用特異性強(qiáng)、不耐熱、人工化學(xué)可脫毒性，%甲醛脫毒后形成類毒素進(jìn)行人工免疫）。可疑菌分別接種克氏雙糖鐵（KIA）尿素靛基質(zhì)動(dòng)力（MIU）來定屬。細(xì)菌生長繁殖分為四期：遲緩期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期、衰亡期19.（腸道桿菌）細(xì)菌的四種生化反應(yīng)：吲哚（I）、甲基紅（M）、VP（V）、枸櫞酸鹽利用（C），合稱為IMViC。營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)入機(jī)體的方式：易化擴(kuò)散、主動(dòng)運(yùn)轉(zhuǎn)（由透性酶完成）、基團(tuán)移位（糖類由磷酸酶磷酸化進(jìn)入胞內(nèi)，不能再透出菌體）。旁路途徑（二）被細(xì)胞的脂多糖激活。IgE可與肥大細(xì)胞膜上的Fc受體結(jié)合。體液免疫：（B淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，CD4+Th輔助，Th2細(xì)胞能分泌細(xì)胞因子ILILILIL10）；效應(yīng)是抗體（Ab）；病毒中和抗體（不能直接滅活病毒，IgG、IgM、IgA）血凝抑制抗體（HLAb）補(bǔ)體結(jié)合抗體。15. 免疫器官：骨髓、胸腺、脾、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾和黏膜免疫系統(tǒng)。外膜層由脂多糖，脂質(zhì)雙層，脂蛋白組成。溫和噬菌體是噬菌體基因組整合于宿主菌染色體中，有溶原性周期、溶菌性周期。大多數(shù)DNA噬菌體的DNA為線狀雙鏈（有尾噬菌體的核酸）；RNA噬菌體的RNA為線狀單鏈（無尾噬菌體的核酸為環(huán)狀單鏈DNA或線狀單鏈RNA）。細(xì)菌質(zhì)粒在重組DNA技術(shù)中常用的載體。原生質(zhì)體與原生質(zhì)球都是細(xì)胞壁缺陷的細(xì)菌。增殖：以二分裂、出芽、巨形體釋放顆粒方式。9. 奧普托欣試驗(yàn)：肺炎鏈球菌敏感。致病性島：由基因編碼決定的一團(tuán)與致病性相關(guān)的基因組。有很大功能的DNA指紋技術(shù)。具有快速、敏感、高通量檢測(cè)平臺(tái)。3）增色效應(yīng)。其具有特異、快速、靈敏、特異性強(qiáng)、操作簡便、能夠定量。：酶免疫技術(shù)（EIA）、協(xié)同凝集試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)（IF）、對(duì)流免疫電泳（CIE）、免疫印跡技術(shù)。各藥敏紙片間距不少于24mm，距平板內(nèi)緣不小于15mm。2. 結(jié)核菌可利用甘油為碳源，梭狀芽胞菌可以氨基酸為碳源，流感嗜血桿菌要Ⅴ，Ⅹ因子才能生長。病毒分類：目、科、亞科、屬、種。屬名VRirus結(jié)尾的單詞,亞科名VRirinae結(jié)尾的單詞,科名VRiridae結(jié)尾的單詞。3. 藥物敏感試驗(yàn)：紙碟法、小杯法、凹孔法、試管法。藥物敏感實(shí)驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn) ：抑菌圈直徑（毫米）：20以上極敏、15~20高敏、10~14中敏、10以下低敏。：核酸雜交、PCR技術(shù)、基因芯片技術(shù)。引物是PCR特異性的決定因素，PCR反應(yīng)中TaqDNA聚合酶、引物加量過多，可引起非靶序列擴(kuò)增。熱變性DNA一般經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性,此過程稱之為 退火，Tm低25℃左右的溫度是復(fù)性的最佳條件。核酸雜交（基因探針雜交技術(shù)）是指單鏈RNA和DNA或DNA和DNA或RNA和RNA，根據(jù)堿基配對(duì)原則，借氫鍵相連而形成雜交分子的過程。一種是罕見切割酶，一種是常用切割酶。7. 病原細(xì)菌確定原則：（郭霍Koch原則）從一種疾病病人中能有規(guī)律地發(fā)現(xiàn)一種細(xì)菌能夠分離這種細(xì)菌獲得純培養(yǎng)把這種細(xì)菌的培養(yǎng)物引入易感動(dòng)物體內(nèi)，可以引起與病人類似的疾病在實(shí)驗(yàn)感染引起的疾病中仍然能夠分離同一種細(xì)菌。10. 雜交分：斑點(diǎn)，菌落原位，Southern（DNA）印跡，Northern（RNA，DNA）印跡。一般菌落有：油煎蛋樣（L），顆粒型（G），絲狀菌落（F），鑒定要點(diǎn)：染色易變多形性，生長在增菌液中微渾，顆粒樣沉淀或沿試管壁生長，返祖現(xiàn)象。12. 細(xì)菌的突變：基因突變（又稱點(diǎn)突變；有堿基對(duì)的置換、插入、或缺失、錯(cuò)碼）、染色體畸變 （易位、倒位、重復(fù)、缺失）。質(zhì)粒的分離提純使用酚處理，用乙醇沉淀。對(duì)紫外線敏感1015分鐘失去活性。噬菌體可以根據(jù)不同細(xì)菌的表面受體來裂解目標(biāo)菌是判定某些種類病原體的重要依據(jù)。細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有核蛋白體（蛋白合成地），核質(zhì)（主要遺傳物質(zhì)）質(zhì)粒，胞質(zhì)顆粒，是細(xì)菌蛋白質(zhì)和酶類合成的重要場(chǎng)所。免疫細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、血小板。IgG在體液中含量最多，分子量小是唯一能通過胎盤的抗體。補(bǔ)體C：存在血清中，不耐熱，可輔助特異性抗體介導(dǎo)的溶菌作用，是抗體發(fā)揮溶細(xì)胞作用的必要補(bǔ)充條件。補(bǔ)體激活酶促級(jí)連反應(yīng)。18. 細(xì)菌生長繁殖的條件:充足的營養(yǎng)、適宜的溫度、合適的酸堿度、必須的氣體環(huán)境。大腸桿菌呈++，產(chǎn)氣桿菌呈++。細(xì)菌代謝所需能量主要以生物氧化作用而來。據(jù)親和性及作用靶點(diǎn)分為:神經(jīng)毒素、細(xì)胞毒素、腸毒素。熱原質(zhì)：脂多糖，多由G產(chǎn)生，耐高溫，可引起發(fā)熱反應(yīng)，高壓蒸氣滅菌（121℃20分鐘）使其破壞。細(xì)胞膜的主要功能：物質(zhì)納泄、生物合成、呼吸作用、形成中介體。23. ，另外以石棉板為濾板的金屬濾器稱Seitz濾器（蔡氏濾器）按濾孔大小分K：最大，澄清用，EKS最小，可阻止大病毒通過EK：居中，除去一般細(xì)菌。質(zhì)粒：不依賴染色體而復(fù)制，不相容性，轉(zhuǎn)移性，指令性，大多數(shù)質(zhì)粒在自然狀態(tài)下是一種閉合環(huán)狀雙鏈DNA。甘油（10％）或10%二甲基亞砜的血清作懸浮細(xì)胞的液體在液氮中保存細(xì)胞，在干冰溫度（70℃）和液態(tài)氮溫度（196℃）下長期保存其感染性；將凍存在小管或安瓿里的細(xì)胞以較慢的冷凍速率（1℃／分鐘）冷凍，直至—150℃，再將這些小管貯存在—150～－196℃的液氮中，解凍做法是：將封口的小管迅速放入37℃的水中，直至所有的冰融化，然后打開管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。潔凈度可達(dá)百級(jí)，只保護(hù)樣品?？顾崛旧ǎ?%石炭酸復(fù)紅、5%鹽酸酒精脫色、美蘭復(fù)染。銀染B液—5%硝酸銀+濃氨水（）成薄霧狀。病毒的復(fù)制周期：吸附、穿入、脫殼、生物合成及組裝、成熟和釋放：條件致死性突變株，空斑和宿主依賴性。干擾素（IFN）具有廣譜抗病毒作用，只能抑制病毒，即通過誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)。B細(xì)胞第一個(gè)合成產(chǎn)物是u鏈。一般有鏈，嗜血，芽胞菌有此功能。37. 轉(zhuǎn)導(dǎo)：以噬菌體為媒介，將供體菌的基因轉(zhuǎn)移到愛體菌內(nèi)而致受體菌基因改變，分普遍和局限。41. 基因重組可使基因再激活表現(xiàn)為：交叉復(fù)活和多重復(fù)活。：菌體表面結(jié)構(gòu)，菌毛，侵襲性酶（凝固酶，透明質(zhì)酸酶，鏈激酶，膠原酶等）。目前以細(xì)菌細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)作最高一級(jí)分類依據(jù)將原核界分為薄，堅(jiān)，軟，疵壁四門。用綠色濾光片。50. 直接鏡檢2h報(bào)告，最后鑒定和藥敏一般不過3天，除血外，必須在24h內(nèi)預(yù)報(bào)53. α溶血是草綠色，β溶血是透明環(huán)，γ溶血紅細(xì)胞不溶解，雙環(huán)。57. 突變種純系動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常染色體中某個(gè)基因發(fā)生了變異的具有各種遺傳缺陷的突變品系動(dòng)物。悉生動(dòng)物：給出無菌動(dòng)物引入已知的5～ 17種正常腸道菌的動(dòng)物。凍干菌種只能使用一次，凍干菌種打開后需要以傳代保存形式保留工作菌種。冷凍干燥保存法是最有效的方法，利用各種斜面和半固體加石蠟油是最常用和最簡便的方法，一般不含糖，不用液體。63. 真菌，霍亂，銅綠及糞堿需在室溫保存，而腦膜炎，淋球，初次分離的流感嗜血菌保存于37℃。是抵抗力最強(qiáng)的無芽胞菌。靜脈血3—5毫升。診斷標(biāo)準(zhǔn)：血清試管凝集試驗(yàn)（SAT）1：100++以上，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）：1；10++67. 萊姆病原：伯道疏螺旋體引起萊姆病，細(xì)胞結(jié)構(gòu)：原生質(zhì)柱、表層、外膜、鞭毛。病原分離：接種BSK培養(yǎng)基33℃培養(yǎng)。其中鼠類和豬為主要的傳染源和儲(chǔ)存宿主，通過人的皮膚黏膜侵入。電鏡下基要本結(jié)構(gòu)：柱形原生質(zhì)體、內(nèi)鞭毛、外膜標(biāo)本：血液、腦脊液在發(fā)病后10天內(nèi)，出現(xiàn)發(fā)熱但未用藥前，不能即時(shí)送檢，血液用不含枸櫞酸鈉抗凝520℃保存，1周內(nèi)接種。69. 致病性鏈球菌：沉淀生長（肺鏈為混濁），在含腹水的培養(yǎng)物上生長良好，溶血株呈絮狀或顆粒狀生長，不溶血株呈均勻混濁生長。(90%對(duì)人致病)B群鏈CAMP試驗(yàn)陽性（鑒定指標(biāo)35℃卵育），馬尿酸鈉水解試驗(yàn)陽性D群鏈七葉甘水解試驗(yàn)變黑色為陽性，%氯化鈉生長試驗(yàn)(黃色)快速檢測(cè):酶標(biāo)免疫測(cè)定法、PCR（A群鏈致熱外毒素A，B，C基團(tuán)speA，speB，speC各溶血素O基團(tuán)slo）。培養(yǎng)時(shí)間過長會(huì)自溶管底澄清，以奧普托欣試驗(yàn)、分解菊糖，膽汁溶菌陽性區(qū)別于甲型溶血性鏈球菌。幾乎所有的肺鏈對(duì)Optochin敏感。臨床上分離最高的是糞腸球菌，可分慶霉素高耐藥和低耐藥，一般用β內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類聯(lián)合。通常采3管腦脊液（化學(xué)、微生物、細(xì)胞學(xué)）含添加劑的巧克力平板（CAP）和血瓊脂平板（BAP），如不能立即接種，則接種至預(yù)熱35℃的轉(zhuǎn)運(yùn)—分離（TI）培養(yǎng)基中保溫通氣，可保存7天，血液采集后1分鐘內(nèi)注入肉湯中。上清液可—20度凍存長時(shí)間。培養(yǎng)基中應(yīng)含萬古霉素、多粘菌素B。標(biāo)本：Ⅰ期梅毒取下疳滲出液（20分鐘內(nèi)查）；Ⅱ梅毒取梅毒疹滲出液或局部淋巴結(jié)抽出液；先天性梅毒取臍血；神經(jīng)梅毒取腦脊液。3435℃，分裂為3033小時(shí)。VDRE以膽固醇為載體。密螺抗原試驗(yàn)（證實(shí)試驗(yàn)）FTAABS作為診斷梅毒“金標(biāo)準(zhǔn)”試驗(yàn)。腸侵襲性型（EIEC）：作用大腸，志賀樣腹瀉，很像菌痢，發(fā)熱腹痛膿血便及里急后重。76. 志賀氏菌分：痢疾（A群），福氏（B群），鮑氏（C群）（半透明、光滑型菌落），宋內(nèi)（D群）（扁平粗糙型菌落）四群，我國以福氏和宋內(nèi)常見，無莢無芽無鞭，KIA：K/A，產(chǎn)氣＋/－，H2S－，MIU－＋/――，最后可用診斷血清作群型鑒定群血清型葡萄糖乳糖甘露醇鳥氨酸脫羧酶痢疾志賀菌A110+福氏B16++鮑氏C118++宋內(nèi)D1+++只有一個(gè)血清型，Ⅰ相和Ⅱ相加熱60℃10分鐘殺死，有強(qiáng)烈的內(nèi)毒素，作用于腸黏膜，使其通透性增高。志賀菌表達(dá)黏附、穿透上皮細(xì)胞、胞內(nèi)繁殖、及擴(kuò)散等活性的基因存在于大質(zhì)粒上。所致疾病4類型：（1）、腸熱癥：第一次菌血癥，發(fā)熱、不適、全身痛，與菌的感染劑量有關(guān)，通常潛伏期為2周，第二次菌血癥，高熱710天，緩脈、肝脾腫大，皮膚出現(xiàn)玫瑰疹，外周白細(xì)胞明顯下降，嚴(yán)重者有出血或腸穿孔等并發(fā)癥。（3）、敗血癥：無癥狀帶菌者：標(biāo)本：第12周采血，接種于室溫＞20℃平衡血培養(yǎng)瓶，不能超過2小時(shí)送樣，不能即時(shí)送樣放在室溫，切勿放冰箱；第34周取糞便；第3周起還可取尿液；整病程均可取骨髓液。尿素酶試驗(yàn)與變形桿菌區(qū)別。血清學(xué)診斷：肥達(dá)試驗(yàn)，一般傷寒沙門菌O凝集效價(jià)＞1：80、H＞1：160，副傷寒H＞1：160具有診斷意義。有明顯多形性，呈球狀或絲狀，生長于10～43℃，在固體培養(yǎng)基上普通和奇異呈遷徙生長現(xiàn)象，三屬氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陽性G桿菌，加入1%石炭酸或苯乙醇使終濃度為1g/%可抑制變形菌遷徒樣生長。小腸耶爾森：無動(dòng)無芽無莢G－，25℃有動(dòng)力，有周鞭毛，最適溫20～28℃，VP試驗(yàn)25℃陽性，37℃陰性，KIA只利用葡萄糖，MIU22℃動(dòng)力陽性37℃陰性?？焖贆z測(cè)；PCR（高度特異性基因：fra、pla、inu、hms）、免疫檢測(cè)（F1抗原）所有疑似鼠疫病人都需采取血標(biāo)本，疑似腺鼠疫病人取腫大淋巴結(jié)穿剌液；肺鼠疫病人取咳痰、咽拭子標(biāo)本。其優(yōu)點(diǎn)標(biāo)記物非常穩(wěn)定。83. 沙雷菌：最適溫10～36℃，4%氯化鈉下可長，產(chǎn)生靈紅霉素（非水溶）和吡羧酸（水溶），關(guān)鍵生化是DNA＋和葡萄糖酸鹽＋。常用的保存或運(yùn)送及增菌用堿性蛋白胨水，文臘二氏，卡布。深入鑒定：流行株與非流行株依靠噬菌體生物分型法。產(chǎn)毒基因鑒定：用PCR檢測(cè)ct基因，流行株常帶有霍亂腸毒素。87. 氣單胞菌最適生長溫度30℃，但在0～45℃皆可生長。標(biāo)本：胃黏膜活檢組織；病原鑒定：生物特性是具有大量高活性的尿素酶，迅速分解尿素，氧化酶＋、觸酶＋，具有堿性磷酸酶、r谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶活性，硝酸鹽還原＋，可生長于5%甘氨酸、%氯化三苯四氮唑培養(yǎng)基中，三糖鐵中不產(chǎn)生硫化氫，微需氧5～8%，37℃生長，25℃和42℃均不生長的G－菌，初次分離要3～4天。91. 有芽胞的厭氧菌：只有梭菌屬包括83個(gè)種。每份標(biāo)本至少接種三個(gè)血平板，置于有氧，無氧，5%～10%CO2環(huán)境中培養(yǎng)。氣液相色譜已成為鑒定厭氧菌及其分類比較可靠的方法。95. 肉毒梭菌：G+，芽胞膠囊于次極端呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀，嚴(yán)格厭氧，8型，以A，B多見，毒素不耐熱，1min煮沸即死。白喉毒素是一種毒性強(qiáng)、抗原性強(qiáng)的蛋白質(zhì)，B棒狀桿菌噬菌體毒素基因（tox+）編碼的蛋白質(zhì)，PCR擴(kuò)增tox+基因輔助診斷不能確診。（白喉類毒素、百日咳菌苗、破傷風(fēng)類毒素的混合疫苗DPT） 98. 百日咳鮑特菌：專性需氧，常用包姜培養(yǎng)基（含青霉素G）細(xì)小S銀灰色不透明珍珠狀菌落，在加血培養(yǎng)基上,周圍有狨毛狀狹窄溶血環(huán)，液體培養(yǎng)基中混濁生長。臨床分為3個(gè)期：卡他期痙咳期恢復(fù)期。MIC最小抑菌濃度101．決定細(xì)菌的形態(tài)因素：培養(yǎng)基的成份、PH、培養(yǎng)時(shí)間、溫度。莢膜的重要功能：抗吞噬。（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動(dòng)物）慢性毒性試驗(yàn)?zāi)康模鹤钚∮凶饔脛┝?、閾劑量、最大未觀察到有害作用劑量（選用兩種種屬及嚙齒類、非嚙齒類，初斷乳動(dòng)物）危害性評(píng)價(jià)組成：認(rèn)定、描述、接觸評(píng)定、特征分析毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目：第一階段：急性毒性試驗(yàn)。生