檢驗(yàn)科微生物室-wenkub
2023-03-10 11:13:55 本頁面
【正文】 CLSI(臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì) )標(biāo)準(zhǔn)化文件要求還相差很遠(yuǎn)，我們應(yīng)進(jìn)行規(guī)范操作，才可能應(yīng)對(duì)微生物向人類的挑戰(zhàn)，才能適應(yīng)臨床的需要。 其質(zhì)量控制環(huán)節(jié)多、涉及的知識(shí)面廣、復(fù)雜性高、需要超強(qiáng)的責(zé)任心。 5. 室間質(zhì)量控制： 是各地實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行質(zhì)量控制的一種方式 ， 也是上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室對(duì)各實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行質(zhì)量管理的手段 。 室內(nèi)質(zhì)控主要包括幾個(gè)方面：實(shí)驗(yàn)室前的質(zhì)量控制 、 標(biāo)本接種前的質(zhì)量控制 、 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 、 試劑質(zhì)量控制 、 常用儀器的質(zhì)量控制 、 藥敏實(shí)驗(yàn)的質(zhì)量控制 、 及發(fā)報(bào)告前的質(zhì)量控制 。 4. 有臨床意義的結(jié)果報(bào)告 （ 報(bào)告的及時(shí) 、 準(zhǔn)確 、 完整 ） 臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的基本裝備 孵育箱、 CO2培養(yǎng)箱、高壓滅菌器 生物安全柜 試劑、染液、質(zhì)控菌株、培養(yǎng)基 冰箱、酒精燈、接種環(huán)、游標(biāo)卡尺、溫度計(jì)等 光學(xué)顯微鏡 ? 室內(nèi)質(zhì)控 室內(nèi)質(zhì)控內(nèi)容包括對(duì)各種實(shí)驗(yàn)條件及實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行監(jiān)督 監(jiān)督的對(duì)象有儀器設(shè)備、培養(yǎng)基、鑒定系統(tǒng)等操作全過程 ? 室間質(zhì)評(píng) 臨床微生物室需建立室內(nèi)質(zhì)控 1 1 2 3 4 常規(guī)試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控 培養(yǎng)基質(zhì)控 藥敏試驗(yàn)的質(zhì)控 自動(dòng)化設(shè)備質(zhì)控 ：鑒定和藥敏、血培養(yǎng)系統(tǒng) ATCC：美國典型菌株保存中心 主要來源 NCTC：英國國家典型菌株保存中 實(shí)驗(yàn)中用標(biāo)準(zhǔn)方法鑒定，鑒定值95％典型菌株，并經(jīng)多次傳代，特征衡定的菌株 質(zhì)控菌株 參考菌株 臨床分離菌 質(zhì)控必備菌株 細(xì)菌名稱 菌號(hào) 用途 金黃色葡萄球菌 ATCC 25923 紙片擴(kuò)散質(zhì)控 金黃色葡萄球菌 ATCC 29213 MIC測定質(zhì)控 大腸桿菌 ATCC 25922 紙片和 MIC 綠膿假單胞菌 ATCC 27853 紙片和 MIC 糞腸球菌 ATCC 29212 胸腺嘧啶含量測定 淋病奈瑟菌 ATCC 49226 淋球菌藥敏 流感嗜血桿菌 ATCC 49247 嗜血桿菌藥敏 肺炎克雷伯菌 ATCC 700603 ESBL陽性菌 低溫速凍 苛養(yǎng)細(xì)菌 冷凍干燥 長期保留菌株 參考菌株保存方法 高層瓊脂 非苛養(yǎng)菌 瓊脂斜面 現(xiàn)用菌株 參考菌株保存方法 室間質(zhì)評(píng) — 樣本的檢測操作程序 1. 測試環(huán)境、儀器、試劑的要求 ① 室溫： 20～ 25℃ ② 濕度： 80% ③ 試劑：所用試劑或試條均為儀器配套產(chǎn)品 ④ 質(zhì)控品：為儀器配套產(chǎn)品，并在使用效期內(nèi)，同時(shí)無變質(zhì)或污染。 3. 質(zhì)評(píng)樣品的測定 ① 質(zhì)控菌株用小牛血清或肉湯溶解，按標(biāo)本種類接種各種選擇培養(yǎng)基，放適當(dāng)環(huán)境培養(yǎng)。 ③ 然后則測定者、室負(fù)責(zé)人簽字。 該項(xiàng)目的總的測定樣本數(shù) ) 100%。 參加證書：不符合合格證書的要求和標(biāo)準(zhǔn)的均頒發(fā)參加證書。如血脂檢測至少兩周內(nèi)保持一般飲食，患者應(yīng)在采血前 24 h禁食高脂肪飲食， 12 h禁食空腹采血，且前 1 d晚禁止大量飲酒。采集標(biāo)本應(yīng)盡量選擇在未使用各種藥物前。 ? 需進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢測的所有標(biāo)本 ， 最好在收集后 2h內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室 。 C存放不超過 24h， 而病毒檢測標(biāo)本可于 4176。 及時(shí) 、 準(zhǔn)確地從患者血液中分離出病原菌 ， 才能正確實(shí)施有效地抗菌治療 ，從而有助于提高治愈率和降低醫(yī)療費(fèi)用 。 ? 發(fā)熱原因不明患者： 24～ 48h后可再采血 2次 ,間隔不少于 60分鐘。 ? 亞急性感染性心內(nèi)膜炎、人工瓣膜：主要病原菌是皮膚正常菌群，應(yīng)自靜脈，而不是留置導(dǎo)管內(nèi)采血。 呼吸道標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng) ? 標(biāo)本留取質(zhì)量的好壞直接影響到對(duì)呼吸道病原學(xué)的診斷 ? 標(biāo)本的采集要盡量減少上呼吸道正常菌群干擾 ? 應(yīng)在用藥前或停藥 1天后留取標(biāo)本 。 ? 標(biāo)本采集后立即送檢 ， 不能立即送檢者 ， 可暫存 4℃ 冰箱 ， 但保存不超過 8h 糞便標(biāo)本的培養(yǎng) ? 應(yīng)在發(fā)病早期并且盡量在用抗生素治療前采集 ， 稀便不少于 1ml， 固體便不少于 1克 ，無便患者可用直腸拭子采集標(biāo)本 。 ⑵ 厭氧細(xì)菌 （ 難辯梭菌 ） 培養(yǎng)的標(biāo)本應(yīng)盡量減少與空氣接觸 。 應(yīng)先用滅菌生理鹽水沖洗表面污染菌 ， 去除舊的分泌物 ， 用滅菌拭子采集病灶深部的分泌物 ， 也可取感染部位下的組織送檢 。 開放性膿腫 ， 采樣前無菌鹽水沖洗傷口 ， 拭去表面污染膿液 ， 挑取病灶深部膿液；封閉性膿液 ， 嚴(yán)格病灶皮膚或黏膜表面的消毒后用無菌干燥注射器穿刺抽取 ， 置無菌試管內(nèi)送檢 ， 或切開排膿時(shí)用無菌拭子采集深部膿液 。斜面的長度 ≤ 試管長度的 2/3。 培養(yǎng)基的質(zhì)量控制 ? 細(xì)菌生長試驗(yàn)： 所有的培養(yǎng)基在使用前還必須做細(xì)菌生長試驗(yàn)以測定培養(yǎng)基性能是否符合要求。 染色液及染色方法質(zhì)量控制： 購買的或配置的染色液 ， 每次需做好相關(guān)的記錄 ， 如操作者和開瓶日期等；還要進(jìn)行染色步驟質(zhì)控 ， 如革蘭染色在一張玻片上同時(shí)涂有金葡菌和大腸桿菌 ， 以保證染色性判斷準(zhǔn)確無誤 。驗(yàn)收時(shí)必須看清生產(chǎn)批號(hào) 、 血清效價(jià) 、 透明度與色澤 。 不要使用過期的血清 。 ? 對(duì)儀器進(jìn)行性能驗(yàn)證，若有兩臺(tái)以上的儀器則要進(jìn)行儀器比對(duì) 細(xì)菌鑒定的基本步驟 1. 標(biāo)本的分離培養(yǎng)（這關(guān)系到整個(gè)結(jié)果的可靠性） 2. 培養(yǎng)結(jié)果的觀察（致病菌的選擇） 3. 細(xì)菌的分純、鑒定（天地人鑒定系統(tǒng)、 ATB半自動(dòng)微生物鑒定、 VITEK系統(tǒng)、MicroScan自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)、 Sensititre 全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)） 常用的培養(yǎng)基種類和用途 ? 血平板 — 普通細(xì)菌用 ? 巧克力平板 — 含 V、 X因子，主要培養(yǎng)嗜血桿菌、腦膜炎球菌和淋球菌用 ? 中國藍(lán) /麥康凱平板 — G桿菌用 ? SS平板 — 沙門氏菌和志賀氏菌用 ? MH平板 — 細(xì)菌藥敏用 ? TCBS平板 — 弧菌科細(xì)菌用 ? 真菌顯色平板 — 真菌培養(yǎng)用 ? 羅氏培養(yǎng)基 — 分枝桿菌用 常見標(biāo)本細(xì)菌培養(yǎng)基選擇 ? 痰 血平板、巧克力平板、（中國藍(lán) /麥康凱）放 CO2環(huán)境，能分離肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌 ? 尿 血平板、（中國藍(lán) /麥康凱）
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