薄層色譜法概述ppt課件(已修改)
2025-05-15 05:21 本頁面
【正文】 2022/5/31 1 第四章 薄 層 色 譜 法 2022/5/31 2 概 述 ? 1938年俄國(guó)人首先實(shí)現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。 1965年德國(guó)化學(xué)家出版了 “ 薄層色譜法 ” 一書，推動(dòng)了這一技術(shù)的發(fā)展。 ? 因 TLC法設(shè)備簡(jiǎn)單，分析速度快，分離效率高，結(jié)果直觀，很快被用作定性和半定量的方法。 ? 70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。 80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)化。 2022/5/31 3 ? 薄層色譜與高效液相色譜的差別（ 特點(diǎn) ） ?固定相和流動(dòng)相 ?TLC——流動(dòng)相流動(dòng)靠毛細(xì)作用力，流動(dòng)相選擇較少受限制，固定相不用再生。 而 HPLC是在封閉的系統(tǒng)內(nèi)，流動(dòng)相流量靠泵控制，溶劑選擇受檢測(cè)器限制，固定相需再生。 ?樣品處理 ?TLC要求 沒有 HPLC嚴(yán)格。 2022/5/31 4 ? 色譜分離 ? TLC可 同時(shí)分離多個(gè)樣品 ，并可采用相同或不同溶劑進(jìn)行同向或雙相 多次展開 ，通常采用 正相 色譜，色譜后 衍生化方便 。 ? HPLC一次只能分離一個(gè)樣品，通常采用反相 色譜，色譜后衍生化受限制。 ?對(duì)污染物抗受力強(qiáng) ?TLC——顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均無影響。 ?HPLC—— 顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均有大的影響。 2022/5/31 5 薄層色譜系統(tǒng) ? 薄層板 ?未改性固定相 ?硅膠 —為使用最廣泛的薄層材料 ?氧化鋁 —有堿性、中性、酸性 ?硅藻土 —為化學(xué)中性吸附劑 ?纖維素 —天然多糖類 ?聚酰胺 —為特殊類型有機(jī)薄層材料，對(duì)能形成氫鍵的物質(zhì)有特別的選擇性。 2022/5/31 6 ?表面改性固定相 ?疏水改性硅膠 ——化學(xué)鍵合烷基 ?親水改性硅膠 ——引入氨基、氰基、二羥基等，薄層板極性介于極性吸附劑和疏水改性劑之間（ 極性次序：硅膠 ﹥ 氨基 ﹥ 氰基 ﹥ 二羥基 ﹥ 反相 ）。 ?表面改性纖維素 ——乙?；w維素 ?藥典收載的固定相有 ：硅膠類、硅藻土類、氧化鋁類、微晶纖維素類等。 顆粒直徑 一般要求 10 – 40 um。 2022/5/31 7 ?載板 ——玻璃板，放在飽和碳酸鈉溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，除去玻璃表面的油污。然后充分漂洗干凈，干燥，置干燥器中備用。要求光滑、平整、洗凈后不附水珠。 ?黏結(jié)劑 ?無機(jī)黏結(jié)劑 ——石膏 （硫酸鈣），添加石膏的吸附劑以字母“ G”表示。沒有黏結(jié)劑的吸附劑以字母“ H”表示。無機(jī)黏結(jié)劑的優(yōu)點(diǎn)是：耐高溫，耐酸堿，但涂鋪薄板動(dòng)作要快，否則勻漿易凝固。薄層強(qiáng)度差。 2022/5/31 8 ?有機(jī)黏結(jié)劑 ——羧甲基纖維素鈉（ CMC） 、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。其特點(diǎn)是薄層強(qiáng)度高、使用方便，但不能用濃硫酸作顯色劑。 ?熒光黏結(jié)劑 ——在吸附劑中添加某種熒光指示劑，常用的熒光指示劑 ?在 254nm紫外光下發(fā)藍(lán)色熒光的有鈉熒光素、硫化鎘、陰極綠等。 ?在 366nm有熒光的指示劑如彩藍(lán)等。 ?含有熒光指示劑的商品吸附劑以“ F”表示，并以下標(biāo)注明其激發(fā)光波長(zhǎng)。例 硅膠 HF254 2022/5/31 9 ? 薄層板涂鋪要求：均勻、平整、無氣泡引起的凹坑和龜裂。例： ?硅膠板（粒度 10 ～ 40um） ?硅膠 G——將硅膠置研缽中，加入少量水，研磨均勻，至無結(jié)塊和氣泡，再加入比例量的水 (一般為 1份固定相與 3份水 )，迅速研磨均勻，立即涂鋪。 ?硅膠或硅膠 G ——以 CMC為黏合劑。配制 % ～ %CMC水溶液 ,放置過夜 ,使懸浮的纖維沉降 ,取上層用來配制吸附劑勻漿。 2022/5/31 10 ?反相薄層板制備 ——以不同鏈長(zhǎng)的 正構(gòu)烷烴為固定液 , 配制成適當(dāng)濃度的溶液 (如 5%硅酮油乙醚溶液 ), 浸漬硅膠板。 ? 薄層板活化 ?涂布后的薄層先在室溫下陰干，在使用前置適當(dāng)溫度烘烤一定時(shí)間進(jìn)行活化，然后置干燥器中備用。不同薄層活化條件略有不同，如： ?硅膠 110℃ 1h ?氧化鋁 110℃ 30min 2022/5/31 11 ? 點(diǎn)樣 ?要求配制樣品的溶劑高度揮發(fā)性和盡可能非極性，否則易使斑點(diǎn)擴(kuò)展。 ?采用多次點(diǎn)加法，第二次點(diǎn)加時(shí)應(yīng)待前一次點(diǎn)加的溶劑揮發(fā)后再進(jìn)行。 ?點(diǎn)樣量應(yīng)適中，過載會(huì)引起斑點(diǎn)拖尾，分離度變差，以最小檢測(cè)量的幾倍 ～ 幾十倍為宜。 ?手工點(diǎn)樣工具：定
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