薄層色譜法概述ppt課件(參考版)
2025-05-06 05:21本頁(yè)面
【正文】 ? 含量測(cè)定 ——主要用于中藥有效成分的分析 2022/5/31 56 ?雜質(zhì)檢查方法 ?雜質(zhì)對(duì)照品法（ A） ?供試品自身對(duì)照法（高低濃度法）（ B） ?對(duì)照物質(zhì)法（ C） 樣 對(duì) 樣 對(duì) 樣 對(duì) A B C 2022/5/31 57 完 。 ?再現(xiàn)性 ——RSD一般應(yīng)在 10%以內(nèi)。 2022/5/31 54 ? 精密度 ?重復(fù)性 ——當(dāng)待測(cè)組分的含量達(dá) 點(diǎn)時(shí) , 方法的重復(fù)性 (RSD)應(yīng)在 %以內(nèi)。 ? 線性與范圍 ——相應(yīng)于待測(cè)組分檢出量的20% 120%范圍。 ?目測(cè)法 ——比較系列標(biāo)準(zhǔn)與樣品的斑點(diǎn)面積大小、顏色深淺，得到樣品的含量范圍。 ?與其他技術(shù)連用 ?TLC付里葉變換 IR聯(lián)用 ?TLCMS聯(lián)用 2022/5/31 52 ? 定量方法 ? 間接定量 ——將薄層分離后物質(zhì)斑點(diǎn)定量地洗脫下來(lái)，再對(duì)洗脫液定量。 2022/5/31 51 ?通過(guò)板上光譜圖定性 ?直接測(cè)定薄層板上斑點(diǎn)的紫外或可見(jiàn)吸收光譜圖，與平行點(diǎn)加的標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的圖譜對(duì)照。 ?可用于定性的板上反應(yīng)有：乙?；?、濃硫酸脫水、偶氮化、酯化、鹵化、酸堿水解、硝化、氧化還原、熱解和光化學(xué)反應(yīng)等。 2022/5/31 49 定性、定量方法 ? 定性方法 ?利用保留值 ?測(cè)定 Rf值 ?測(cè)定相對(duì) Rf值，即 Rx值。 ? 展開(kāi)距離 ——同一試樣等量點(diǎn)樣，同樣展開(kāi)，展開(kāi)距離不同將引起誤差。 ? 試樣變質(zhì) 時(shí) ——試樣展開(kāi)后，應(yīng)馬上進(jìn)行測(cè)定，如果放置一星期后再測(cè)定。在理論曲線上選擇吸光度 0 – 1之間的 7個(gè)點(diǎn)，將各吸光度值轉(zhuǎn)換為直線上的值，得到一條通過(guò)原點(diǎn)的直線。即物質(zhì)濃度越大，薄層試樣板上測(cè)定的反射吸光度比直線關(guān)系所示值越低。 ?高速掃描系統(tǒng) ——可分為兩類 ?光柵掃描系統(tǒng) ?位敏掃描系統(tǒng) ?這類掃描儀技術(shù)上一些問(wèn)題還未解決。本法適合于本身無(wú)顏色，又無(wú)特征紫外吸收或熒光的物質(zhì)。為消除激發(fā)光的影響，在板層和檢測(cè)器之間必須加一塊濾光片，以截去反射激發(fā)光，只讓發(fā)射的熒光抵達(dá)檢測(cè)器。適合于本身有顏色或有紫外吸收的物質(zhì)。同一斑點(diǎn)從 A、 B、 C三個(gè)不同方向掃描，鋸齒掃描所得積分值變動(dòng)小，而直線掃描所得積分值變動(dòng)大。 ? 鋸齒式掃描 ——照射在薄層板上的光束與薄層板的相對(duì)運(yùn)動(dòng)軌跡呈鋸齒形或矩形。光束固定，掃描板臺(tái)運(yùn)動(dòng)。反射吸收度與物質(zhì)含量有確定關(guān)系，可進(jìn)行定量。將薄層板從左至右移動(dòng)，對(duì)斑點(diǎn)掃描，單色光透過(guò)薄層板后被記錄下來(lái)，將測(cè)得的吸收度對(duì) Rf值繪制掃描曲線，得薄層色譜圖 光源 單色器 2022/5/31 39 ? 反射光法 ? 一定波長(zhǎng)的光照射薄層，穿進(jìn)薄層內(nèi)的光部分被薄層吸收，部分經(jīng)過(guò)漫反射又折回表面成為反射光。 ? 雙光束單波長(zhǎng) ——可補(bǔ)償光源不穩(wěn)引起的誤差，但對(duì)板層不均勻無(wú)作用。 近表面 遠(yuǎn)表面 光（ I） 鏡反射或表面反射 Is(表面平滑 ) 漫反射 (表面粗糙 ) 入射強(qiáng)度 I0 出射強(qiáng)度 (IT ) IT / I0為薄層透射率 AT 返回光強(qiáng) (IR ) IR / I0為介 質(zhì)的漫反射率AR I0 （ IR + IT ） =差為被介質(zhì)吸收并轉(zhuǎn)換為熱的光強(qiáng) 2022/5/31 37 ? 光學(xué)系統(tǒng) ? 薄層色譜掃描儀光學(xué)系統(tǒng)有三種 ? 單光束單波長(zhǎng) ——受光源穩(wěn)定性和薄層質(zhì)量影響嚴(yán)重。 ? 薄層色譜定量測(cè)定的光學(xué)方法是基于測(cè)量斑點(diǎn)和薄層空白處光學(xué)響應(yīng)信號(hào)的差值。并通過(guò)隨行標(biāo)準(zhǔn)比較待測(cè)斑點(diǎn)的量。采用雙槽層析缸尤為有利。尤其是使用混合溶劑時(shí)，極性較弱和沸點(diǎn)較低的溶劑，在薄層邊緣容易揮發(fā)，使邊緣部分的展開(kāi)劑中極性溶劑的比例增大， Rf相對(duì)增大。 ? 預(yù)吸附還可能影響 Rf在 離。例如可將活化薄層板放在相對(duì)濕度恒定的空間里來(lái)達(dá)到調(diào)節(jié)活度的目的。 2022/5/31 32 ? 固定相的活度及其調(diào)節(jié) 在其他因素一定時(shí)，活度增加， Rf值減少，反之亦然。這種影響一般使分配系數(shù)變小。當(dāng)然，對(duì)于這一問(wèn)題實(shí)際上只是在定量斑點(diǎn)濃度時(shí)才需要考慮。 ? 也可采用兩種強(qiáng)溶劑與一種弱溶劑組成的三元混合流動(dòng)相 ，此時(shí)，溶劑強(qiáng)度由弱溶劑控制，而溶劑選擇性則由兩強(qiáng)溶劑控制。 ? 用乙醚或甲醇代替流動(dòng)相中的一種較強(qiáng)組分，由于形成 氫鍵 可改善選擇性。 ? R=1/4（ ? 1） [?k /（
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