薄層色譜法概述ppt課件(參考版)
2025-05-06 05:21本頁面
【正文】 ? 含量測定 ——主要用于中藥有效成分的分析 2022/5/31 56 ?雜質(zhì)檢查方法 ?雜質(zhì)對照品法（ A） ?供試品自身對照法（高低濃度法）（ B） ?對照物質(zhì)法（ C） 樣 對 樣 對 樣 對 A B C 2022/5/31 57 完 。 ?再現(xiàn)性 ——RSD一般應(yīng)在 10%以內(nèi)。 2022/5/31 54 ? 精密度 ?重復(fù)性 ——當(dāng)待測組分的含量達 點時 , 方法的重復(fù)性 (RSD)應(yīng)在 %以內(nèi)。 ? 線性與范圍 ——相應(yīng)于待測組分檢出量的20% 120%范圍。 ?目測法 ——比較系列標(biāo)準與樣品的斑點面積大小、顏色深淺，得到樣品的含量范圍。 ?與其他技術(shù)連用 ?TLC付里葉變換 IR聯(lián)用 ?TLCMS聯(lián)用 2022/5/31 52 ? 定量方法 ? 間接定量 ——將薄層分離后物質(zhì)斑點定量地洗脫下來，再對洗脫液定量。 2022/5/31 51 ?通過板上光譜圖定性 ?直接測定薄層板上斑點的紫外或可見吸收光譜圖，與平行點加的標(biāo)準斑點的圖譜對照。 ?可用于定性的板上反應(yīng)有：乙?；饬蛩崦撍?、偶氮化、酯化、鹵化、酸堿水解、硝化、氧化還原、熱解和光化學(xué)反應(yīng)等。 2022/5/31 49 定性、定量方法 ? 定性方法 ?利用保留值 ?測定 Rf值 ?測定相對 Rf值，即 Rx值。 ? 展開距離 ——同一試樣等量點樣，同樣展開，展開距離不同將引起誤差。 ? 試樣變質(zhì) 時 ——試樣展開后，應(yīng)馬上進行測定，如果放置一星期后再測定。在理論曲線上選擇吸光度 0 – 1之間的 7個點，將各吸光度值轉(zhuǎn)換為直線上的值，得到一條通過原點的直線。即物質(zhì)濃度越大，薄層試樣板上測定的反射吸光度比直線關(guān)系所示值越低。 ?高速掃描系統(tǒng) ——可分為兩類 ?光柵掃描系統(tǒng) ?位敏掃描系統(tǒng) ?這類掃描儀技術(shù)上一些問題還未解決。本法適合于本身無顏色，又無特征紫外吸收或熒光的物質(zhì)。為消除激發(fā)光的影響，在板層和檢測器之間必須加一塊濾光片，以截去反射激發(fā)光，只讓發(fā)射的熒光抵達檢測器。適合于本身有顏色或有紫外吸收的物質(zhì)。同一斑點從 A、 B、 C三個不同方向掃描，鋸齒掃描所得積分值變動小，而直線掃描所得積分值變動大。 ? 鋸齒式掃描 ——照射在薄層板上的光束與薄層板的相對運動軌跡呈鋸齒形或矩形。光束固定，掃描板臺運動。反射吸收度與物質(zhì)含量有確定關(guān)系，可進行定量。將薄層板從左至右移動，對斑點掃描，單色光透過薄層板后被記錄下來，將測得的吸收度對 Rf值繪制掃描曲線，得薄層色譜圖 光源 單色器 2022/5/31 39 ? 反射光法 ? 一定波長的光照射薄層，穿進薄層內(nèi)的光部分被薄層吸收，部分經(jīng)過漫反射又折回表面成為反射光。 ? 雙光束單波長 ——可補償光源不穩(wěn)引起的誤差，但對板層不均勻無作用。 近表面 遠表面 光（ I） 鏡反射或表面反射 Is(表面平滑 ) 漫反射 (表面粗糙 ) 入射強度 I0 出射強度 (IT ) IT / I0為薄層透射率 AT 返回光強 (IR ) IR / I0為介 質(zhì)的漫反射率AR I0 （ IR + IT ） =差為被介質(zhì)吸收并轉(zhuǎn)換為熱的光強 2022/5/31 37 ? 光學(xué)系統(tǒng) ? 薄層色譜掃描儀光學(xué)系統(tǒng)有三種 ? 單光束單波長 ——受光源穩(wěn)定性和薄層質(zhì)量影響嚴重。 ? 薄層色譜定量測定的光學(xué)方法是基于測量斑點和薄層空白處光學(xué)響應(yīng)信號的差值。并通過隨行標(biāo)準比較待測斑點的量。采用雙槽層析缸尤為有利。尤其是使用混合溶劑時，極性較弱和沸點較低的溶劑，在薄層邊緣容易揮發(fā)，使邊緣部分的展開劑中極性溶劑的比例增大， Rf相對增大。 ? 預(yù)吸附還可能影響 Rf在 離。例如可將活化薄層板放在相對濕度恒定的空間里來達到調(diào)節(jié)活度的目的。 2022/5/31 32 ? 固定相的活度及其調(diào)節(jié) 在其他因素一定時，活度增加， Rf值減少，反之亦然。這種影響一般使分配系數(shù)變小。當(dāng)然，對于這一問題實際上只是在定量斑點濃度時才需要考慮。 ? 也可采用兩種強溶劑與一種弱溶劑組成的三元混合流動相 ，此時，溶劑強度由弱溶劑控制，而溶劑選擇性則由兩強溶劑控制。 ? 用乙醚或甲醇代替流動相中的一種較強組分，由于形成 氫鍵 可改善選擇性。 ? R=1/4（ ? 1） [?k /（
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