薄層色譜法概述ppt課件-wenkub
2023-05-18 05:21:53 本頁(yè)面
【正文】 ? 又 k=K（ Vs/ Vm） ?Rf=Vm/（ Vm+KVs） =1/（ 1+k） ?k ∞ 9 4 2 1 0 ?Rf 0 1 2022/5/31 21 ?分離參數(shù) ?R= ?因 Ls=Rf L。 Lr 原點(diǎn) 參比 樣品 前沿 2022/5/31 18 ?注意： ?同一物質(zhì)在不同展開(kāi)方式中得到的比移值是不相同的。用針頭將斑點(diǎn)標(biāo)記下來(lái)，放在通風(fēng)處使碘揮發(fā)。 ? 斑點(diǎn)定位方法 ?碘蒸氣法 ——靈敏、簡(jiǎn)便，為通用顯色法。該技術(shù)主要用于制備色譜。因無(wú)溶劑前沿，需要有個(gè)參照物同時(shí)展開(kāi)，以計(jì)算相對(duì)保留值。展開(kāi)距離一般為 1015cm。 ? 特點(diǎn) ：適合于大量稀樣品溶液的噴加；條帶寬度不超過(guò) 2mm，有利于改善分辨率；便于狹縫式光密度計(jì)掃描；要求薄層板強(qiáng)度高。 ?采用多次點(diǎn)加法，第二次點(diǎn)加時(shí)應(yīng)待前一次點(diǎn)加的溶劑揮發(fā)后再進(jìn)行。配制 % ～ %CMC水溶液 ,放置過(guò)夜 ,使懸浮的纖維沉降 ,取上層用來(lái)配制吸附劑勻漿。 ?含有熒光指示劑的商品吸附劑以“ F”表示，并以下標(biāo)注明其激發(fā)光波長(zhǎng)。 2022/5/31 8 ?有機(jī)黏結(jié)劑 ——羧甲基纖維素鈉（ CMC） 、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。 ?黏結(jié)劑 ?無(wú)機(jī)黏結(jié)劑 ——石膏 （硫酸鈣），添加石膏的吸附劑以字母“ G”表示。 顆粒直徑 一般要求 10 – 40 um。 ?HPLC—— 顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均有大的影響。 ?樣品處理 ?TLC要求 沒(méi)有 HPLC嚴(yán)格。 ? 70年代中后期發(fā)展了高效薄層色譜。2022/5/31 1 第四章 薄 層 色 譜 法 2022/5/31 2 概 述 ? 1938年俄國(guó)人首先實(shí)現(xiàn)了在氧化鋁薄層上分離一種天然藥物。 80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)化。 2022/5/31 4 ? 色譜分離 ? TLC可 同時(shí)分離多個(gè)樣品 ，并可采用相同或不同溶劑進(jìn)行同向或雙相 多次展開(kāi) ，通常采用 正相 色譜，色譜后 衍生化方便 。 2022/5/31 5 薄層色譜系統(tǒng) ? 薄層板 ?未改性固定相 ?硅膠 —為使用最廣泛的薄層材料 ?氧化鋁 —有堿性、中性、酸性 ?硅藻土 —為化學(xué)中性吸附劑 ?纖維素 —天然多糖類(lèi) ?聚酰胺 —為特殊類(lèi)型有機(jī)薄層材料，對(duì)能形成氫鍵的物質(zhì)有特別的選擇性。 2022/5/31 7 ?載板 ——玻璃板，放在飽和碳酸鈉溶液中浸泡數(shù)小時(shí)，除去玻璃表面的油污。沒(méi)有黏結(jié)劑的吸附劑以字母“ H”表示。其特點(diǎn)是薄層強(qiáng)度高、使用方便，但不能用濃硫酸作顯色劑。例 硅膠 HF254 2022/5/31 9 ? 薄層板涂鋪要求：均勻、平整、無(wú)氣泡引起的凹坑和龜裂。 2022/5/31 10 ?反相薄層板制備 ——以不同鏈長(zhǎng)的 正構(gòu)烷烴為固定液 , 配制成適當(dāng)濃度的溶液 (如 5%硅酮油乙醚溶液 ), 浸漬硅膠板。 ?點(diǎn)樣量應(yīng)適中，過(guò)載會(huì)引起斑點(diǎn)拖尾，分離度變差，以最小檢測(cè)量的幾倍 ～ 幾十倍為宜。 ?自動(dòng)薄層色譜點(diǎn)樣儀 ——由計(jì)算機(jī)控制。 ?多次展開(kāi) ——一次展開(kāi)未達(dá)滿意分離時(shí)，可將薄層板干燥后再次用同一種溶劑展開(kāi)，可重復(fù)多次，直到混合物分離為止。 ? 二維展開(kāi) ——在兩個(gè)垂直的方向上進(jìn)行展開(kāi)。 ? 鍥尖技術(shù) ——圓形離心展開(kāi)具有分辨率高的優(yōu)點(diǎn)，但需要有一定的儀器裝置。 將碘結(jié)晶放在密封的展開(kāi)缸中，碘的升華，使缸內(nèi)充滿紫色的碘蒸氣。 2022/5/31 17 薄層色譜參數(shù) ? 保留參數(shù)（ Rf值） ?用來(lái)表征斑點(diǎn)位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱(chēng)作 比移值 ，用 Rf表示。 ?在同樣溶劑的重復(fù) n次的多次展開(kāi)后的比移值 (Rf)n=1(1Rf)n 。同時(shí)對(duì)相鄰的兩個(gè)斑點(diǎn)，假定 W1=W2=W ?則 R= L。實(shí)際上在 TLC中，分配與吸附是并存的（大氣中水分也是一種固定相）。溶質(zhì)的 Rf值就越大。 ? 許多溶劑有吸濕性，使溶劑含水量不一致，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)難以重現(xiàn)。要求操作格外小心，同時(shí)混合流動(dòng)相不應(yīng)重復(fù)使用。 ? 用乙醚或甲醇代替流動(dòng)相中的一種較強(qiáng)組分，由于形成 氫鍵 可改善選擇性。當(dāng)然，對(duì)于這一問(wèn)題實(shí)際上只是在定量斑點(diǎn)濃度時(shí)才需要考慮。 2022/5/31 32 ? 固定相的活度及其調(diào)節(jié) 在其他因素一定時(shí)，活度增加， Rf值減少，反之亦然。 ? 預(yù)吸附還可能影響 Rf在
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