薄層色譜法概述ppt課件-wenkub.com
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【正文】 ? 檢測(cè)限 ? 定量限 ? 準(zhǔn)確度 2022/5/31 55 應(yīng)用 ? 藥物鑒別 ——采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法 ? 雜質(zhì)檢查 ?雜質(zhì)對(duì)照品法 ?高低濃度法 ?藥物標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照法 ?不允許有雜質(zhì)斑點(diǎn)存在，即以方法靈敏度來控制雜質(zhì)量。 ? 靈敏度 ——通常以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率表示。 ?分光光度法、 HPLC法、 GC法、質(zhì)譜法 ? 直接定量 ?斑點(diǎn)面積測(cè)量 ——用透明紙覆蓋在薄層表面，描出斑點(diǎn)界限，然后測(cè)量其面積。通過加熱、噴霧等方法施加反應(yīng)試劑。 ? 展開方法 ——使用直線化功能定量時(shí)，為避免展開距離不同產(chǎn)生的誤差，實(shí)際定量時(shí)，將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品在同一塊板上展開是較理想的。 2022/5/31 47 吸光度 0 物質(zhì)量 經(jīng)變換后的直線 理論曲線 直線化方法示意圖 校正過度 校正適當(dāng) 校正不足 未校正 試樣量 積分值 校正情況判斷 2022/5/31 48 ? 使用直線化功能時(shí)的注意事項(xiàng) ? 發(fā)色試樣 的測(cè)定 ——對(duì)于沒有吸收的試樣進(jìn)行發(fā)色測(cè)定時(shí)，一般不使用直線化功能就可以得到近似的直線關(guān)系。 2022/5/31 46 ? 掃描定量中的標(biāo)準(zhǔn)曲線校正 ?薄層板上由于光被吸附劑散射，不能得到象通常溶液測(cè)定時(shí)的吸光度和濃度之間的簡(jiǎn)單直線關(guān)系。 濾光片 熒光 檢 測(cè) 器 2022/5/31 44 ? 熒光淬滅測(cè)量 ——吸附劑有熒光，樣品斑點(diǎn)無熒光，在紫外光照射下，被測(cè)物在熒光背景上顯示出暗灰斑點(diǎn)。 2022/5/31 42 ? 測(cè)量方式 ? 吸光度測(cè)量 ——測(cè)定的是 漫反射光 。光束落在薄層上的截面為一長(zhǎng)方形帶。當(dāng)對(duì)薄層進(jìn)行掃描時(shí)，測(cè)量其反射吸收度，可得到反射光譜。 ? 單光束雙波長(zhǎng) ——對(duì)背景不均勻引起的干擾有補(bǔ)償作用，選擇的兩個(gè)波長(zhǎng)應(yīng)接近些。 ? 間接法 ——將部分照射光的能量轉(zhuǎn)換成較長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光，即 熒光 測(cè)量。 同一物質(zhì)在同一薄層板上出現(xiàn)中間部分的 Rf值比邊緣的 Rf值小 ，即邊緣效應(yīng)，若在展開前先將展開槽與薄層板用 展開劑蒸氣飽和后再展開 ，邊緣效應(yīng)可消失。 ? 實(shí)際工作中常常使固定相預(yù)吸附一定量單一或混合溶劑蒸氣，預(yù)吸附量越大，溶劑前沿運(yùn)動(dòng)速度越快，物質(zhì)斑點(diǎn)的 Rf值越小。如兩個(gè)相鄰斑點(diǎn)中后面的一個(gè)展開速度較其單獨(dú)展開時(shí)為大。 2022/5/31 30 ? 斑點(diǎn)的擴(kuò)散與形狀 在 TLC中斑點(diǎn)的移動(dòng)與擴(kuò)散是二維的，因?yàn)榘唿c(diǎn)在展開方向和與之垂直方向上的擴(kuò)散速度是不相等的，展開劑的移動(dòng)速度也是不等的，在單位體積或單位質(zhì)量薄層內(nèi)所含的溶劑量越接近溶劑前沿減少得越明顯，直至溶劑前沿時(shí)為零，這一現(xiàn)象稱為“ 溶劑的體積梯度 ”，在各種展開形式中均存在。 ? 流動(dòng)相中較強(qiáng)組分的 體積比 小于 5%或大于 50%，選擇性最大，此時(shí)最有利于溶質(zhì)與流動(dòng)相組分的選擇性相互作用。 ? 對(duì)于易揮發(fā)的溶劑，難于配制穩(wěn)定組成的流動(dòng)相。 2022/5/31 26 ? 一些常用溶劑的溶劑強(qiáng)度與溶解度參數(shù) ? 溶劑 ?? ? 溶劑 ?? ? ? 正己烷 環(huán)己烷 ? 苯 乙醚 ? 二氯甲烷 正丙醇 ? 正丁醇 / 四氫呋喃 ? 乙酸乙酯 氯仿 ? 甲乙酮 / 二氧六環(huán) ? 吡啶 丙酮 ? 乙醇 / 乙酸 ? 二甲亞砜 甲醇 ? 乙二醇 甲酰胺 / 2022/5/31 27 ? 流動(dòng)相選擇時(shí)需考慮溶劑的下列情況 ? 一些溶劑如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保護(hù)劑，有時(shí)需重蒸除去乙醇。流動(dòng)相強(qiáng)度越高，表示它與吸附劑相互作用力強(qiáng)?？稍谡归_前，將薄層板浸入某種液體固定相。 ?塔片高度 h真實(shí) = Ls/ n真實(shí) 2022/5/31 20 ?容量因子（ k）與比移值（ Rf） ?k=ts/ tm（物質(zhì)在兩相中滯留時(shí)間之比）
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