《薄層色譜法概述》ppt課件-文庫吧
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【正文】 容玻璃毛細管（ 1 –5ul），微量注射器。 2022/5/31 12 ? 自動點樣 ? Limomat IV 噴樣儀 ——樣品溶液通過氣流成霧狀噴向薄層，移動板臺，使在薄層上流下樣品條帶。 ? 特點 ：適合于大量稀樣品溶液的噴加；條帶寬度不超過 2mm，有利于改善分辨率；便于狹縫式光密度計掃描；要求薄層板強度高。 ?自動薄層色譜點樣儀 ——由計算機控制。 ? 藥典規(guī)定：點樣基線距底邊 , 樣點直徑24mm, 點間距離約為 。 2022/5/31 13 ? 展開方式 ?多數(shù)采用直線形上行展開，薄層板水平角度以 75? 為最佳。展開距離一般為 1015cm。 ?多次展開 ——一次展開未達滿意分離時，可將薄層板干燥后再次用同一種溶劑展開，可重復(fù)多次，直到混合物分離為止。 ?分步展開 ——混合物性質(zhì)差別較大時，一種流動相不能有效分離時，可采用不同溶劑依次展開不同距離。 2022/5/31 14 ? 連續(xù)展開 ——使到達薄層上緣的溶劑不斷蒸發(fā)，連續(xù)展開以增加展開距離。因無溶劑前沿，需要有個參照物同時展開，以計算相對保留值。 ? 二維展開 ——在兩個垂直的方向上進行展開。將樣品點在薄層板的一個角上，展開適當距離后，揮干溶劑，再將薄層板以與原展開方向成 90 ? 的方向進行展開。 原點 1 2 2022/5/31 15 ? 離心展開 ——薄層板以適當轉(zhuǎn)速旋轉(zhuǎn)時，流動相以適當速率轉(zhuǎn)移到薄層上。該技術(shù)主要用于制備色譜。 ? 鍥尖技術(shù) ——圓形離心展開具有分辨率高的優(yōu)點，但需要有一定的儀器裝置。采用鍥尖技術(shù)可以在一般的展開室中進行類似展開。 薄層被刮掉部分 溶劑前沿 2022/5/31 16 ? 檢測 ? 物理方法 ——紫外光下顯示熒光或熒光淬滅 ? 化學(xué)方法 ——加化學(xué)試劑顯色，要求顯色穩(wěn)定、持久、專屬、靈敏、線性良好。 ? 斑點定位方法 ?碘蒸氣法 ——靈敏、簡便，為通用顯色法。 將碘結(jié)晶放在密封的展開缸中，碘的升華，使缸內(nèi)充滿紫色的碘蒸氣。將展開后的板揮干溶劑置碘缸中至薄層色譜上出現(xiàn)棕色斑點。放置時間不宜太長，否則背景吸附劑也吸附碘，使信噪比降低。用針頭將斑點標記下來，放在通風(fēng)處使碘揮發(fā)。 2022/5/31 17 薄層色譜參數(shù) ? 保留參數(shù)（ Rf值） ?用來表征斑點位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱作 比移值 ，用 Rf表示。 ? Rf=Ls/L。 ， 原點 S R W Ls L。 Lr 原點 參比 樣品 前沿 2022/5/31 18 ?注意： ?同一物質(zhì)在不同展開方式中得到的比移值是不相同的。 ?在同樣溶劑的重復(fù) n次的多次展開后的比移值 (Rf)n=1(1Rf)n 。 ? 相對比移值（ Rx） ?Rf測量中一個重要的誤差來源是難以確定溶劑前沿的位置，因此，引入 相對比移值 （ Rx）。 Rx=Ls/Lr 2022/5/31 19 ?分離效能參數(shù) ?理論塔片數(shù) n=16[Ls/W] 2 ，考慮靜態(tài)擴散引起的起始斑點半峰寬的影響引入真實塔片數(shù)（ n真實 ） ?n真實 =[Ls/（ b0 ） ] 2 ? ， b0樣品起始斑點半峰寬。 ?塔片高度 h真實 = Ls/ n真實 2022/5/31 20 ?容量因子（ k）與比移值（ Rf） ?k=ts/ tm（物質(zhì)在兩相中滯留時間之比） ? 又 k=K（ Vs/ Vm） ?Rf=Vm/（ Vm+KVs） =1/（ 1+k） ?k ∞ 9 4 2 1 0 ?Rf 0 1 2022/5/31 21 ?分離參數(shù) ?R= ?因 Ls=Rf L。，同時對相鄰的兩個斑點，假定 W1=W2=W ?則 R= L。 = ⊿ Rf ?與 n=16[Ls/W] 2式合并，得： 2(Ls2Ls1) W1+W2 Rf2 Rf1 W L。 W 2022/5/31 22 ? R= ? 由上式， Rf與 R之間存在著如圖所示關(guān)系 n 4 ⊿Rf Rf1 Rf1 R 0 Rf=,R最高 Rf在 ,R變化不大 Rf﹤ 或 ﹥ ,R下降 2022/5/31 23
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