薄層色譜法概述ppt課件(已改無錯字)
2023-06-03 05:21:53 本頁面
【正文】 反之亦然。可通過預(yù)吸附溶劑分子，調(diào)節(jié)其表面活性。例如可將活化薄層板放在相對濕度恒定的空間里來達(dá)到調(diào)節(jié)活度的目的。 ? 實(shí)際工作中常常使固定相預(yù)吸附一定量單一或混合溶劑蒸氣，預(yù)吸附量越大，溶劑前沿運(yùn)動速度越快，物質(zhì)斑點(diǎn)的 Rf值越小。 ? 預(yù)吸附還可能影響 Rf在 離。 2022/5/31 33 ? 在層析過程中發(fā)生的 邊緣效應(yīng) 就是由于這種因素引起的。尤其是使用混合溶劑時，極性較弱和沸點(diǎn)較低的溶劑，在薄層邊緣容易揮發(fā)，使邊緣部分的展開劑中極性溶劑的比例增大， Rf相對增大。 同一物質(zhì)在同一薄層板上出現(xiàn)中間部分的 Rf值比邊緣的 Rf值小 ，即邊緣效應(yīng)，若在展開前先將展開槽與薄層板用 展開劑蒸氣飽和后再展開 ，邊緣效應(yīng)可消失。采用雙槽層析缸尤為有利。 2022/5/31 34 預(yù)吸附中 展開中 展開過程中用不同于展開劑的溶劑調(diào)節(jié)槽內(nèi)氣氛 2022/5/31 35 薄層掃描 ? 原理 ? 薄層定量方法可分為 ? 直接法 ——測定照射光照射色譜后，因被測物斑點(diǎn)的存在引起的 透射光 和 反射光 的變化。并通過隨行標(biāo)準(zhǔn)比較待測斑點(diǎn)的量。 ? 間接法 ——將部分照射光的能量轉(zhuǎn)換成較長波長的熒光，即 熒光 測量。 ? 薄層色譜定量測定的光學(xué)方法是基于測量斑點(diǎn)和薄層空白處光學(xué)響應(yīng)信號的差值。 2022/5/31 36 ? 一強(qiáng)度為 I的光照射薄層時，被照射的一面為“近表面”，另一面為“遠(yuǎn)表面”。 近表面 遠(yuǎn)表面 光（ I） 鏡反射或表面反射 Is(表面平滑 ) 漫反射 (表面粗糙 ) 入射強(qiáng)度 I0 出射強(qiáng)度 (IT ) IT / I0為薄層透射率 AT 返回光強(qiáng) (IR ) IR / I0為介 質(zhì)的漫反射率AR I0 （ IR + IT ） =差為被介質(zhì)吸收并轉(zhuǎn)換為熱的光強(qiáng) 2022/5/31 37 ? 光學(xué)系統(tǒng) ? 薄層色譜掃描儀光學(xué)系統(tǒng)有三種 ? 單光束單波長 ——受光源穩(wěn)定性和薄層質(zhì)量影響嚴(yán)重。 ? 單光束雙波長 ——對背景不均勻引起的干擾有補(bǔ)償作用，選擇的兩個波長應(yīng)接近些。 ? 雙光束單波長 ——可補(bǔ)償光源不穩(wěn)引起的誤差，但對板層不均勻無作用。 光 單色器 檢測器 光 波長 1 波長 2 檢測器 斬波器 光 單色器 分 光 鏡 檢測器 檢測器 2022/5/31 38 ? 透射光法 ? 測定組分對應(yīng)的斑點(diǎn)對特定波長光的吸收度來確定含量。將薄層板從左至右移動，對斑點(diǎn)掃描，單色光透過薄層板后被記錄下來，將測得的吸收度對 Rf值繪制掃描曲線，得薄層色譜圖 光源 單色器 2022/5/31 39 ? 反射光法 ? 一定波長的光照射薄層，穿進(jìn)薄層內(nèi)的光部分被薄層吸收，部分經(jīng)過漫反射又折回表面成為反射光。當(dāng)對薄層進(jìn)行掃描時，測量其反射吸收度，可得到反射光譜。反射吸收度與物質(zhì)含量有確定關(guān)系，可進(jìn)行定量。 光源 單色器 2022/5/31 40 ? 掃描方式 ? 直線式掃描 ——照射在薄層板上的光束與薄層板作直線相對運(yùn)動。光束固定，掃描板臺運(yùn)動。光束落在薄層上的截面為一長方形帶。 ? 鋸齒式掃描 ——照射在薄層板上的光束與薄層板的相對運(yùn)動軌跡呈鋸齒形或矩形。 直線掃描 鋸齒掃描 輪廓曲線 積分曲線 2022/5/31 41 A B C A B C C A B 對于不規(guī)則斑點(diǎn)，兩種掃描結(jié)果不一樣。同一斑點(diǎn)從 A、 B、 C三個不同方向掃描，鋸齒掃描所得積分值變動小，而直線掃描所得積分值變動大。 2022/5/31 42 ? 測量方式 ? 吸光度測量 ——測定的是 漫反射光 。適合于本身有顏色或有紫外吸收的物質(zhì)。 I0 IR 檢 測 器 2022/5/31 43 ? 熒光測量 ——靈敏度較吸光度測量高，板層不吸收發(fā)射光，測量噪音小，基線穩(wěn)定。為消除激發(fā)光的影響，在板層和檢測器之間必須加一塊濾光片，以截去反射激發(fā)光，只讓發(fā)射的熒光抵達(dá)檢測器。 濾光片 熒光 檢 測 器 2022/5/31 44 ? 熒光淬滅測量 ——吸附劑有熒光，樣品斑點(diǎn)無熒光，在紫外光照射下，被測物在熒光背景上顯示出暗灰斑點(diǎn)。本法適合于本身無顏色，又無特征紫外吸收或熒光的物質(zhì)。該測量技術(shù)有三種形式： 測熒光 測紫外光 測紫外和熒光 2022/5/31 45 ? 掃描儀 ?
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1