高效液相色譜法教程-文庫吧
2025-04-19 02:20 本頁面
【正文】 色譜儀 色譜柱，就需要高壓泵注入流動相。 對泵的要求：輸出壓力高、流量范圍大、流量恒定、無脈動，流量精度和重復(fù)性為 %左右。此外，還應(yīng)耐腐蝕，密封性好。 高壓輸液泵，按其性質(zhì)可分為 恒壓泵 和 恒流泵 兩大類。 恒流泵是能給出恒定流量的泵，其流量與流動相粘度和柱滲透無關(guān)。 恒壓泵是保持輸出壓力恒定，而流量隨外界阻力變化而變化，如果系統(tǒng)阻力不發(fā)生變化，恒壓泵就能提供恒定的流量。 11 第二節(jié) 高效液相色譜儀 3. 梯度洗脫裝置 梯度洗脫 就是在分離過程中使兩種或兩種以上不同極性的溶劑按一定程序連續(xù)改變它們之間的比例，從而使流動相的強度、極性、 pH值或離子強度相應(yīng)地變化，達到提高分離效果，縮短分析時間的目的。 梯度洗脫裝置分為兩類： 一類是 外梯度裝置 （又稱低壓梯度），流動相在常溫常壓下混合，用高壓泵壓至柱系統(tǒng)，僅需一臺泵即可。 另一類是 內(nèi)梯度裝置 （又稱高壓梯度），將兩種溶劑分別用泵增壓后，按電器部件設(shè)置的程序，注入梯度混合室混 12 第二節(jié) 高效液相色譜儀 合，再輸至柱系統(tǒng)。 梯度洗脫的實質(zhì) 是通過不斷地變化流動相的強度，來調(diào)整混合樣品中各組分的 k值，使所有譜帶都以最佳平均 k值通過色譜柱。它在液相色譜中所起的作用相當于氣相色譜中的程序升溫，所不同的是，在梯度洗脫中溶質(zhì) k值的變化是通過溶質(zhì)的極性、 pH值和離子強度來實現(xiàn)的，而不是借改變溫度（溫度程序）來達到。 二、進樣系統(tǒng) 進樣系統(tǒng)包括進樣口、注射器和進樣閥等，它的作用是把分析試樣有效地送入色譜柱上進行分離。 13 第二節(jié) 高效液相色譜儀 三、分離系統(tǒng) 分離系統(tǒng)包括色譜柱、恒溫器和連接管等部件。色譜柱一般用內(nèi)部拋光的不銹鋼制成。其內(nèi)徑為 2 ~ 6mm， 柱長為 10 ~50cm， 柱形多為直形，內(nèi)部充滿微粒固定相。柱溫一般為室溫或接近室溫。 四、檢測器 檢測器是液相色譜儀的關(guān)鍵部件之一。對檢測器的要求是： 靈敏度高，重復(fù)性好、線性范圍寬、死體積小以及對溫度和流量的變化不敏感等 。 在液相色譜中，有兩種類型的檢測器，一類是 溶質(zhì)性檢 14 第二節(jié) 高效液相色譜儀 測器 ，它僅對被分離組分的物理或物理化學(xué)特性有響應(yīng)。屬于此類檢測器的有紫外、熒光、電化學(xué)檢測器等；另一類是總體檢測器 ，它對試樣和洗脫液總的物理和化學(xué)性質(zhì)響應(yīng)。屬于此類檢測器有示差折光檢測器等。 15 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 一、固定相 高效液相色譜固定相 以承受高壓能力 來分類，可分為 剛性固體和硬膠 兩大類。 剛性固體以 二氧化硅 為基質(zhì)，可承受 ?108~?109Pa的高壓，可制成直徑、形狀、孔隙度不同的顆粒。如果在二氧化硅表面鍵合各種官能團，可擴大應(yīng)用范圍，它是目前最廣泛使用的一種固定相。 硬膠主要用于離子交換和尺寸排阻色譜中，它由 聚苯乙烯與二乙烯苯基交聯(lián)而成 。可承受壓力上限為 ?108Pa。 固定相按 孔隙深度 分類，可分為表面多孔型和全多孔型固定相 16 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 兩類。 1. 表面多孔型固定相 它的基體是實心玻璃球 ， 在玻璃球外面覆蓋一層多孔活性材料 ， 如硅膠 、 氧化硅 、 離子交換劑 、 分子篩 、 聚酰胺等 。這類固定相的多孔層厚度小 、 孔淺 ， 相對死體積小 ， 出峰迅速 、 柱效亦高；顆粒較大 ， 滲透性好 ， 裝柱容易 ， 梯度淋洗時能迅速達到平衡 ， 較適合做常規(guī)分析 。 由于多孔層厚度薄 ，最大允許量受到限制 。 2. 全多孔型固定相 由直徑為 10nm的硅膠微粒凝聚而成 。 這類固定相由于顆 17 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 粒很細（ 5~10?m）， 孔仍然較淺，傳質(zhì)速率快，易實現(xiàn)高效、高速。特別適合復(fù)雜混合物分離及痕量分析。 二、流動相 由于高效液相色譜中流動相是液體，它對組分有親合力，并參與固定相對組分的競爭，因此，正確選擇流動相直接影響組分的分離度。對流動相溶劑的要求是： （ 1）溶劑對于待測樣品，必須具有合適的極性和良好的選 擇性。 （ 2）溶劑與檢測器匹配。對于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選 用檢測器波長比 溶劑的紫外截止波長 要長。所謂溶劑 18 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 的紫外截止波長指當小于截止波長的輻射通過溶劑時， 溶劑對此輻射產(chǎn)生強烈吸收，此時溶劑被看作是光學(xué)不 透明的，它嚴重干擾組分的吸收測量。 對于折光率檢測器，要求選擇與組分折光率有較 大差別的溶劑作流動相，以達到最高靈敏度。 （ 3）高純度 由于高效液相色譜靈敏度高，對流動相溶劑的純度也 要求高。不純的溶劑會引起基線不穩(wěn)，或產(chǎn)生“偽 峰”。 19 第三節(jié) 高效液相色譜的固定相 和流動相 （ 4）化學(xué)穩(wěn)定性好
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