薄層色譜法ppt課件(參考版)
2025-01-21 16:46本頁面
【正文】 2022/2/11 66 ? 本章作業(yè)題 1. 比移值 ,分配系數(shù) ,分離度 ,理論塔板數(shù) ,外標法和內(nèi)標法的含義及求法分別是什么 ? 2. 簡述薄層色譜法分離樣品的步驟 . 。 F. 記錄峰面積。 D. 確定光斑起始位置，進行色譜掃描。 2022/2/11 65 B. 對欲測斑點進行原位光譜掃描，根據(jù)斑點的吸收光譜選擇最大吸收峰波長作為 λ1；選擇斑點吸收光譜的基線部分，既該化合物無吸收處的波長為樣品的參考波長 λ2。 （ 2）展開：將點好的薄層板放置在密閉的展開槽中，用展開劑進行展開（一般需 30 min左右）， Rf 值 ~間即可，然后取出薄層板將展開劑揮發(fā)至干。L和 2 181。 ? （ 4）背景補償：補償背景吸收光的影響。 ? （ 2）鋸齒掃描法：用以消除因斑點形狀不規(guī)則、大小不等以及濃度分布不均勻帶來的測量誤差。 ? （ 1）雙波長法：試樣斑點最大吸收波長定為樣品波長 λ1 ，試樣斑點不吸收的波長定為參考波長 λ2 。 2022/2/11 62 三、 儀器與試劑 ? 儀器： ? 島津 CS9301 型薄層色譜掃描儀具有多功能、自動化程度較高的特點，它包括主機及 數(shù)據(jù)處理兩部分。 ? 分析的基本原理是用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長、一定強度的光照射到薄層斑點上，對整個斑點進行掃描，用儀器測量通過斑點或被斑點反射的光束強度的變化達到定量分析的目的。甲基苯甲?；?)纖維素(CTMB)、三 (4．硝基苯甲?；?)纖維素 (CTPNB)和微晶纖維素，混合水和乙醇制備手性固定相薄層板，分析了 6對含氮手性藥物 (普洛萘爾，異丙嗪，氯喹，氧氟沙星， D51， D66)，確定了各藥物的 R 值 . 2022/2/11 59 一 .雙波長薄層色譜掃描法測定甲基紅含量 2022/2/11 60 學習利用島津 CS9301 型薄層色譜掃描儀測定甲基紅含量的原理與方法 ， 初步了解 CS9301 型薄層色譜掃描儀的結(jié)構(gòu)與使用 。使用硅膠 G薄層色譜與 IR、NMR聯(lián)用分析了溴敵隆乳油，并用紫外分光光度定量；使用硅膠 G薄層色譜分析了 23種氨基酸，確定了各自的相對展距；應(yīng)用硅膠 GF 薄層色譜、單波長反射鋸齒掃描定量分析了鹵代萘與叔己酮碳負離子的親核取代反應(yīng)產(chǎn)物 萘基叔己酮。應(yīng)用硅膠 GF 薄層高效色譜板分析了大豆磷脂酰膽堿 (SPC)粗品中的大豆磷脂酰膽堿；劉宇紅等應(yīng)用硅膠 GF 薄層高效色譜板，分析了食品甜味劑三氯半乳蔗糖 (TGS)；應(yīng)用硅膠 G薄層色譜單波長反射鋸齒掃描定量分析了蔗糖酯中的蔗糖單酯與蔗糖多酯；應(yīng)用硅膠 G薄層色譜雙波長反射鋸齒掃描及與HPLC聯(lián)用，定量分析了豬油中的膽固醇；應(yīng)用硅膠高效板，單波長反射法吸收掃描定量分析了調(diào)味品姜黃中的姜黃素。 Nemergut等應(yīng)用單波長反射薄層掃描定量分析了土壤中多環(huán)芳香烴苯并 a芘，殷少元等應(yīng)用硅膠GF 薄層色譜與 CG— MS聯(lián)用分析了水中殘存農(nóng)藥滅多威，應(yīng)用硅膠 GF 薄層板定性分析了有機磷農(nóng)藥甲胺磷，Mahammad應(yīng)用硅膠 G+氧化鋁 G+微晶纖維素 +硅藻土 G自制板。在毒物分析方面 ,應(yīng)用硅膠 GF薄層板分析了咖啡因、安替比林、嗎啡、安定等 50種毒物。毒物分析的內(nèi)容比較廣泛，包括植物毒素、真菌毒素、興奮劑、藥物中毒、走私毒品、農(nóng)藥以及尸檢、刑偵破案等方面的樣品分析。李素琴應(yīng)用硅膠 60色譜板分離了蟾酥中的哇巴因，將哇巴因斑點洗脫液進行反向高效液相色譜定量分析。陳代賢等分離了真?zhèn)瓮淋蜍咧械耐淋蜍?，葛早川等分離了黃連、香連丸、加味左金丸中的小檗堿、巴馬汀和藥根堿，然后用雙波長反射鋸齒薄層掃描定量分析各有效成分。 2022/2/11 53 ? 此法更廣泛應(yīng)用于中草藥與中成藥主要有效成分定量分析，如應(yīng)用各種改性硅膠 G薄層色譜，馬柏林等分離了杜仲葉中桃葉珊瑚甙，張尊聽等分離了葛根、葛根注射液、玉泉丸中的葛根素 。 ? 含量測定 ——主要用于中藥有效成分的分析 2022/2/11 51 2022/2/11 52 應(yīng)用薄層掃描即薄層色譜與紫外分光光度或熒光光度分析聯(lián)用，可進行各種藥物的定量分析。 ? 展開方法 ——使用直線化功能定量時，為避免展開距離不同產(chǎn)生的誤差，實際定量時，將已知濃度的標準品在同一塊板上展開是較理想的。即使近似地呈直線狀也往往不能通過原點，認為是試樣變質(zhì)所引起的。 2022/2/11 48 吸光度 0 物質(zhì)量 經(jīng)變換后的直線 理論曲線 直線化方法示意圖 校正過度 校正適當 校正不足 未校正 試樣量 積分值 校正情況判斷 2022/2/11 49 ? 使用直線化功能時的注意事項 ? 發(fā)色試樣 的測定 ——對于沒有吸收的試樣進行發(fā)色測定時，一般不使用直線化功能就可以得到近似的直線關(guān)系。掃描儀系統(tǒng)設(shè)計時考慮到這一問題，采用微機處理使標準曲線直線化。該測量技術(shù)有三種形式： 測熒光 測紫外光 測紫外和熒光 2022/2/11 47 ? 掃描定量中的標準曲線校正 ?薄層板上由于光被吸附劑散射，不能得到象通常溶液測定時的吸光度和濃度之間的簡單直線關(guān)系。 濾光片 熒光 檢 測 器 2022/2/11 46 ? 熒光淬滅測量 ——吸附劑有熒光，樣品斑點無熒光，在紫外光照射下，被測物在熒光背景上顯示出暗灰斑點。 I0 IR 檢 測 器 2022/2/11 45 ?熒光測量 ——靈敏度較吸光度測量高，板層不吸收發(fā)射光，測量噪音小，基線穩(wěn)定。 光 單色器 檢測器
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