薄層色譜法ppt課件-展示頁
2025-01-27 16:46本頁面
【正文】 進(jìn)行。 ?涂布后的薄層先在室溫下陰干，在使用前置適當(dāng)溫度烘烤一定時(shí)間進(jìn)行活化，然后置干燥器中備用。配制% ～ % CMC水溶液 ,放置過夜 ,使懸浮的纖維沉降 ,取上層用來配制吸附劑勻漿。例： ?硅膠板（粒度 10～ 40um） ?硅膠 G—將硅膠置研缽中，加入少量水，研磨均勻，至無結(jié)塊和氣泡，再加入比例量的水 (一般為 1份固定相與 3份水 )，迅速研磨均勻，立即涂鋪。 ?含有熒光指示劑的商品吸附劑以 “ F”表示，并以下標(biāo)注明其激發(fā)光波長。 (3)熒光黏結(jié)劑 ——在吸附劑中添加某種熒光指示劑，常用的熒光指示劑 ?在 254nm紫外光下發(fā)藍(lán)色熒光的有鈉熒光素、硫化鎘、陰極綠等。 2022/2/11 14 (2)有機(jī)黏結(jié)劑 ——羧甲基纖維素鈉（ CMC） 、淀粉、聚乙烯醇、高分子聚合物等。無機(jī)黏結(jié)劑的優(yōu)點(diǎn)是：耐高溫，耐酸堿，但涂鋪薄板動(dòng)作要快，否則勻漿易凝固。 (1)無機(jī)黏結(jié)劑 ——石膏 （硫酸鈣），添加石膏的吸附劑以字母 “ G”表示。然后充分漂洗干凈，干燥，置干燥器中備用。 顆粒直徑 一般要求 10 – 40 um。 2022/2/11 12 (2)表面改性固定相 ?疏水改性硅膠 ——化學(xué)鍵合烷基 ?親水改性硅膠 ——引入氨基、氰基、二羥基等，薄層板極性介于極性吸附劑和疏水改性劑之間（ 極性次序：硅膠 ﹥ 氨基 ﹥ 氰基 ﹥ 二羥基 ﹥ 反相 ）。 K’ = WS / Wm = (cS / cm )（ Vs/ Vm） =K（ Vs/ Vm） 其中 K = cS / cm ，表示 分配系數(shù)，即分離達(dá)到平衡時(shí)，組分在固定相和流動(dòng)相的濃度之比。 Rx=Ls/Lr 2022/2/11 7 ?理論塔板數(shù) n=16[Ls/W] 2 ，考慮靜態(tài)擴(kuò)散引起的起始斑點(diǎn)半峰寬的影響引入真實(shí)塔板數(shù)（ n真實(shí) ） ?n真實(shí) =[Ls/（ b0 ） ] 2 ? ， b0樣品起始斑點(diǎn)半峰寬。 n次的多次展開后的比移值 (Rf)n=1(1Rf)n 。 ， 原點(diǎn) S R W Ls L。 2022/2/11 5 薄層色譜法的基本原理 ?（ Rf值） ?用來表征斑點(diǎn)位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱作 比移值 ，用 Rf表示。 ?對污染物抗受力強(qiáng) ?TLC——顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均無影響。 2022/2/11 4 ?色譜分離 TLC可 同時(shí)分離多個(gè)樣品 ，并可采用相同或不同溶劑進(jìn)行同向或雙相 多次展開 ，通常采用 正相 色譜，色譜后 衍生化方便 。 而 HPLC是在封閉的系統(tǒng)內(nèi)，流動(dòng)相流量靠泵控制，溶劑選擇受檢測器限制，固定相需再生。 80年代以后發(fā)展了薄層色譜光密度掃描儀，和各步操作的儀器化，并實(shí)現(xiàn)了計(jì)算機(jī)化。 TLC法設(shè)備簡單，分析速度快，分離效率高，結(jié)果直觀，很快被用作定性和半定量的方法。2022/2/11 1 層 色 譜 法 (Thin layer chromatography, TLC) 2022/2/11 2 概 述 種天然藥物。 1965年德國化學(xué)家出版了 “ 薄層色譜法 ” 一書，推動(dòng)了這一技術(shù)的發(fā)展。 。 2022/2/11 3 （ 特點(diǎn) ） ?固定相和流動(dòng)相 ?TLC——流動(dòng)相流動(dòng)靠毛細(xì)作用力，流動(dòng)相選擇較少受限制，固定相不用再生。 ?樣品處理 ?TLC要求 沒有 HPLC嚴(yán)格。 ? HPLC一次只能分離一個(gè)樣品，通常采用反相 色譜，色譜后衍生化受限制。 ?HPLC—— 顆粒物質(zhì)、腐蝕性物質(zhì)、不可逆吸附物質(zhì)均有大的影響。 ?Rf=Ls/L。 Lr 原點(diǎn) 參比 樣品 前沿 2022/2/11 6 ?注意： 值是不相同的。 ? 相對比移值（ Rx） ?Rf測量中一個(gè)重要的誤差來源是難以確定溶劑前沿的位置，因此，引入 相對比移值 （ Rx）。 ?塔板高度 h真實(shí) = Ls/ n真實(shí) 2022/2/11 8 3. 容量因子（ K’） 容量因子 : 分配達(dá)到平衡后，組分在固定相的量（ WS)與流動(dòng)相中的量（ Wm)之比。 21 01 2 1 2 1 22 ( ) 22 SS fRLL LRdW W W W W W??? ?? ? ?? ? ?兩 個(gè) 斑 點(diǎn) 中 心 距 離 兩 峰 頂 距 離兩 個(gè) 斑 點(diǎn) 寬 度 的 平 均 值 兩 峰 底 寬 度 的 平 均 值2022/2/11 9 1200122ffW W WL R L RRW W W???????假 定則另有 n=16[Ls/W] 2 001224f f ffL R L R RnRW W W R? ? ?? ? ??則2022/2/11 10 Rf R 0 Rf=,R最高 Rf在 ,R變化不大 Rf﹤ 或 ﹥ ,R下降 001224f f ffL R L R RnRW W W R? ? ?? ? ??2022/2/11 11 薄層色譜系統(tǒng)及其操作技術(shù) 一 . 薄層色譜系統(tǒng)組成 1. 薄層板 (1)未改性固定相 ?硅膠 —為使用最廣泛的薄層材料 ?氧化鋁 —有堿性、中性、酸性 ?硅藻土 —為化學(xué)中性吸附劑 ?纖維素 —天然多糖類 ?聚酰胺 —為特殊類型有機(jī)薄層材
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