高效液相色譜法bppt課件-展示頁
2025-05-16 12:08本頁面
【正文】 一、牢固的單分子薄層而構(gòu)成的固定相 ? 分離機(jī)制：分配 + 吸附 （ 以 LLC為基礎(chǔ) ） ? 特點(diǎn)： 不易流失； 熱穩(wěn)定性好 化學(xué)性能好； 載樣量大 適于梯度洗脫 （二）固定相 載體：幾乎都用 硅膠 。 液相色譜中 ， 只需幾種不同極性的固定液即可 。第三節(jié) 高效液相色譜 法 的主要類型及其分離原理 一 、液－液色譜法（或稱液－液分配色譜法） 分離機(jī)制：利用組分在兩相中溶解度的差異 (一 )固定相 載體 +固定液 （ 物理或機(jī)械涂漬法 ） 缺點(diǎn)： 系統(tǒng)內(nèi)部壓力大 ， 易流失 ， 不實(shí)用 常用的幾類載體 ： （ 1） 表面多孔型載體 （ 薄殼型微珠載體 ） 由直徑為 30～ 40 ?m的實(shí)心玻璃球和厚度約為1～ 2 ?m 的多孔性外層所組成 （ 2） 全多孔型載體 ： 由硅膠 、 硅藻土等材料制成 ， 直徑 30 ～ 50 ?m 的多孔型顆粒 （ 3） 全多孔型微粒載體 ： 由 nm級(jí)的硅膠微粒堆積而成 ， 又稱堆積硅珠 。 這種載體粒度為 5 ～10 ?m 固定液 由于液相色譜中 ， 流動(dòng)相參與選擇作用 ， 流動(dòng)相極性的微小變化 ， 都會(huì)使組分的保留值出現(xiàn)較大的差異 。 如 β ,β ′ — 氧二丙腈 （ ODPN） ， 聚乙二醇 （ PEG） ， 十八烷 （ ODS） 和角鯊?fù)楣潭ㄒ旱?。 一般可分三類： （ 1） 疏水基團(tuán) 如不同鏈長的烷烴 （ C8和 C18。 （ 3） 離子交換基團(tuán) 如作為陰離子交換基團(tuán)的胺基 ， 季鍍鹽；作為陽離子交換 基團(tuán)的磺酸等 . 鍵合固定相的制備 （ l） 硅氧碳鍵型 （ 硅酸酯型 ） （ ≡ SiOC ） 鍵合相 最先用于液相色譜的健合固定相 ,用醇與硅醇基發(fā)生酯化反應(yīng) ?？捎梅菢O性或強(qiáng)極性的溶劑作為流動(dòng)相 （ 3） 硅碳型 （ ≡ SiC） 鍵合相 將硅膠表面氯化后 ， 使 SiCl鍵轉(zhuǎn)化為 SiC鍵 。 缺點(diǎn)： 該反應(yīng)不方便；當(dāng)使用水溶液時(shí)，必須限制 pH在 4～ 8范圍內(nèi) . （ 4） 硅烷化 （ ≡ Si— O－ Si－ C） 鍵合固定相 將硅膠與有機(jī)氯硅烷或烷氧基硅烷反應(yīng)制備 。 固定相在 pH = 2～ 范圍內(nèi)對(duì)水穩(wěn)定 ， 有機(jī)分子與載體間的結(jié)合牢固 ， 固定相不易流失穩(wěn)定性好 。它們用于反相色譜法，在70℃ 以下和 pH 2～ 8范圍內(nèi)可正常工作 （三）流動(dòng)相 正相鍵合相色譜法 流動(dòng)相極性小于固定相極性 。常用溶劑有：氯仿 、 二氯甲烷 、 乙腈 、 醇類等 。 ? 固定相一般為 C1 C8 ? 應(yīng)用最廣泛 正相色譜和反相色譜 正相色譜和反相色譜的差別： 正相色譜 反相色譜 固定相極性 大 小 流動(dòng)相極性 小至中等 中至大 組分流出順序 極性小的組分先流出 極性大的組分先流出 流動(dòng)相極性增大 保留時(shí)間變小 保留時(shí)間變大 分離組分 油溶性或水溶性的極性 和強(qiáng)極性化合物 非極性、極性或離子型 化合物 三、 液－固色譜法（或稱吸附色譜法） 流動(dòng)相為液體，固定相為固體吸附劑 （ 一 ） 原理 分離機(jī)制：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定相表面吸附活性中心能力的差異 )1(0msR VVKtt ???msVVKk ?? 分離前提： K不等或 k不等 固定相：與 LC比，固定相粒徑不同（ 10μm） （ 1）硅膠 表面多孔型 （薄殼硅膠） 全多孔 型
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