《高效液相色譜法b》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 值可用加入適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑 （ 調(diào)節(jié)劑 ） 的辦法調(diào)節(jié)洗脫強(qiáng)度 。具有相當(dāng)?shù)哪蜔嵝院突瘜W(xué)穩(wěn)定性 ， 是目前應(yīng)用最為廣泛的鍵合相 。 由于這類(lèi)鍵合固定相的有機(jī)表面是一些單體 ，具有良好的傳質(zhì)特性 ,但這些酯化過(guò)的硅膠填料易水解且受熱不穩(wěn)定 ， 因此僅 適用于不含水或醇的流動(dòng)相 （ 2） 硅氮型 （ ≡ SiN ） 鍵合相 將硅膠表面的羥基先轉(zhuǎn)化成鹵素（氯化），再與各種有機(jī)胺反應(yīng)，可以得到各種不同極性基因的鍵合相。 (二 )流動(dòng)相 要求流動(dòng)相對(duì)固定相的溶解度盡可能小 ，因此固定液和流動(dòng)相的性質(zhì)往往處于 兩個(gè)極端 ? 正相色譜 ——固定液極性 流動(dòng)相極性 極性小的組分先出柱 ， 極性大的組分后出柱 適于分離極性組分 ? 反相色譜 ——固定液極性 流動(dòng)相極性 極性大的組分先出柱 ， 極性小的組分后出柱 適于分離非極性組分 二、化學(xué)鍵合相色譜法 （一）原理 ? 化學(xué)鍵合相：利用化學(xué)反應(yīng)，通過(guò)共價(jià)鍵將有機(jī)基團(tuán)鍵合在載體（硅膠）表面，形成均一、牢固的單分子薄層而構(gòu)成的固定相 ? 分離機(jī)制：分配 + 吸附 （ 以 LLC為基礎(chǔ) ） ? 特點(diǎn)： 不易流失； 熱穩(wěn)定性好 化學(xué)性能好； 載樣量大 適于梯度洗脫 （二）固定相 載體：幾乎都用 硅膠 。第三節(jié) 高效液相色譜 法 的主要類(lèi)型及其分離原理 一 、液－液色譜法（或稱(chēng)液－液分配色譜法） 分離機(jī)制：利用組分在兩相中溶解度的差異 (一 )固定相 載體 +固定液 （ 物理或機(jī)械涂漬法 ） 缺點(diǎn)： 系統(tǒng)內(nèi)部壓力大 ， 易流失 ， 不實(shí)用 常用的幾類(lèi)載體 ： （ 1） 表面多孔型載體 （ 薄殼型微珠載體 ） 由直徑為 30～ 40 ?m的實(shí)心玻璃球和厚度約為1～ 2 ?m 的多孔性外層所組成 （ 2） 全多孔型載體 ： 由硅膠 、 硅藻土等材料制成 ， 直徑 30 ～ 50 ?m 的多孔型顆粒 （ 3） 全多孔型微粒載體 ： 由 nm級(jí)的硅膠微粒堆積而成 ， 又稱(chēng)堆積硅珠 。 如 β ,β ′ — 氧二丙腈 （ ODPN） ， 聚乙二醇 （ PEG） ， 十八烷 （ ODS） 和角鯊?fù)楣潭ㄒ旱?。 （ 3） 離子交換基團(tuán) 如作為陰離子交換基團(tuán)的胺基 ， 季鍍鹽；作為陽(yáng)離子交換 基團(tuán)的磺酸等 . 鍵合固定相的制備 （ l） 硅氧碳鍵型 （ 硅酸酯型 ） （ ≡ SiOC ） 鍵合相 最先用于液相色譜的健合固定相 ,用醇與硅醇基發(fā)生酯化反應(yīng) 。 缺點(diǎn)： 該反應(yīng)不方便；當(dāng)使用水溶液時(shí)，必須限制 pH在 4～ 8范圍內(nèi) . （ 4） 硅烷化 （ ≡ Si— O－ Si－ C） 鍵合固定相 將硅膠與有機(jī)氯硅烷或烷氧基硅烷反應(yīng)制備 。它們用于反相色譜法，在70℃ 以下和 pH 2～ 8范圍內(nèi)可正常工作 （三）流動(dòng)相 正相鍵合相色譜法 流動(dòng)相極性小于固定相極性 。 ? 固定相一般為 C1 C8 ? 應(yīng)用最廣泛 正相色譜和反相色譜 正相色譜和反相色譜的差別： 正相色譜 反相色譜 固定相極性 大 小 流動(dòng)相極性 小至中等 中至大 組分流出順序 極性小的組分先流出 極性大的組分先流出 流動(dòng)相極性增大 保留時(shí)間變小 保留時(shí)間變大 分離組分 油溶性或水溶性的極性 和強(qiáng)極性化合物 非極性、極性或離子型 化合物 三、 液－固色譜法（或稱(chēng)吸附色譜法） 流動(dòng)相為液體，固定相為固體吸附劑 （ 一 ） 原理 分離機(jī)制：利用溶質(zhì)分子占據(jù)固定
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