薄層色譜法ppt課件-文庫吧資料
2025-01-24 16:46本頁面
【正文】 光 波長 1 波長 2 檢測器 斬波器 光 單色器 分 光 鏡 檢測器 檢測器 2022/2/11 44 ? 測量方式 ?吸光度測量 ——測定的是 漫反射光 。 ?單光束雙波長 ——對背景不均勻引起的干擾有補(bǔ)償作用，選擇的兩個波長應(yīng)接近些。同一斑點(diǎn)從 A、 B、 C三個不同方向掃描，鋸齒掃描所得積分值變動小，而直線掃描所得積分值變動大。 ?鋸齒式掃描 ——照射在薄層板上的光束與薄層板的相對運(yùn)動軌跡呈鋸齒形或矩形。光束固定，掃描板臺運(yùn)動。反射吸收度與物質(zhì)含量有確定關(guān)系，可進(jìn)行定量。將薄層板從左至右移動，對斑點(diǎn)掃描，單色光透過薄層板后被記錄下來，將測得的吸收度對 Rf值繪制掃描曲線，得薄層色譜圖 光源 單色器 2022/2/11 40 ? 反射光法 ?一定波長的光照射薄層，穿進(jìn)薄層內(nèi)的光部分被薄層吸收，部分經(jīng)過漫反射又折回表面成為反射光。 ?薄層色譜定量測定的光學(xué)方法是基于測量斑點(diǎn)和薄層空白處光學(xué)響應(yīng)信號的差值。并通過隨行標(biāo)準(zhǔn)比較待測斑點(diǎn)的量。 ?靈敏度 ——通常以標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率表示。 方法認(rèn)證 ?選擇性 ——以分離度表示，待測組分的 Rf值在 – ?穩(wěn)定性 ——考察在采樣、樣品預(yù)處理、貯存、展開，展開后處理等過程中的樣品穩(wěn)定性。 ? 中間精密度 ——多數(shù)情況下， RSD應(yīng)在 %以內(nèi)。 ?內(nèi)標(biāo)法 :選一個純度高、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、在薄層上能與對照品分開的物質(zhì)作內(nèi)標(biāo)物 ，并準(zhǔn)確稱取加到被測物中，根據(jù)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量算出被測物的含量。定量時，點(diǎn)樣量必須準(zhǔn)確，樣品與對照品應(yīng)點(diǎn)在同一塊薄層板上。 ?目測法 ——比較系列標(biāo)準(zhǔn)與樣品的斑點(diǎn)面積大小、顏色深淺，得到樣品的含量范圍。 ?與其他技術(shù)連用 ?TLC付里葉變換 IR聯(lián)用 ?TLCMS聯(lián)用 2022/2/11 35 二 .定量方法 ——將薄層分離后物質(zhì)斑點(diǎn)定量地洗脫下來，再對洗脫液定量。 ?利用二維色譜（改變色譜條件，比較Rf值是否一致） s b1 b2 b2 s b1 s b1 b2 點(diǎn)樣 第一次展開 第二次展開 2022/2/11 34 ?通過板上光譜圖定性 ?直接測定薄層板上斑點(diǎn)的紫外或可見吸收光譜圖，與平行點(diǎn)加的標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)的圖譜對照。采用雙槽層析缸尤為有利。尤其是使用混合溶劑時，極性較弱和沸點(diǎn)較低的溶劑，在薄層邊緣容易揮發(fā)，使邊緣部分的展開劑中極性溶劑的比例增大， Rf相對增大。 ? 預(yù)吸附還可能影響 Rf在 。例如可將活化薄層板放在相對濕度恒定的空間里來達(dá)到調(diào)節(jié)活度的目的。 2022/2/11 30 在其他因素一定時，固定相活度增加， Rf值減少，反之亦然。這種影響一般使分配系數(shù)變小。當(dāng)然，對于這一問題實(shí)際上只是在定量斑點(diǎn)濃度時才需要考慮。 ? 也可采用兩種強(qiáng)溶劑與一種弱溶劑組成的三元混合流動相 ，此時，溶劑強(qiáng)度由弱溶劑控制，而溶劑選擇性則由兩強(qiáng)溶劑控制。 ? 用乙醚或甲醇代替流動相中的一種較強(qiáng)組分，由于形成 氫鍵 可改善選擇性。 2022/2/11 26 一些常用溶劑的溶劑強(qiáng)度與溶解度參數(shù) 溶劑 ?? ? 溶劑 ?? ? 正己烷 環(huán)己烷 苯 乙醚 二氯甲烷 正丙醇 正丁醇 / 四氫呋喃 乙酸乙酯 氯仿 甲乙酮 / 二氧六環(huán) 吡啶 丙酮 乙醇 / 乙酸 二甲亞砜 甲醇 乙二醇 甲酰胺 / 2022/2/11 27 ： ? 增加溶劑強(qiáng)度 ，使 Rf值增大，但也可能降低分離能力。 為得到滿意的分離，選用的流動相使溶質(zhì)的 Rf值在 – 宜。 流動相強(qiáng)度越高，表示它與吸附劑相互作用力強(qiáng) 。 ：化學(xué)鍵合相反相展開、化學(xué)鍵合相正相展開、離子交換、離子對色譜、凝膠、膠束、手性展開?？稍谡归_前，將薄層板浸入某種液體固定相。用針頭將斑點(diǎn)標(biāo)記下來，放在通風(fēng)處使碘揮發(fā)。將展開后的板揮干溶劑置碘缸中至薄層色譜上出現(xiàn)棕色斑點(diǎn)。 ? 斑點(diǎn)定位方法 ?碘蒸氣法 ——靈敏、簡便，為通用顯色法。采用鍥尖技術(shù)可以在一般的展開室中進(jìn)行類似展開。該技術(shù)主要用于制備色譜。將樣品點(diǎn)在薄層板的一個角上，展開適當(dāng)距離后，揮干溶劑，再將薄層板以與原展開方向成 90 ? 的方向進(jìn)行展開。因無溶劑前沿，需要有個參照物同時展開，以計算相對保留值。 ?分步展開 ——混合物性質(zhì)差別較大時，一種流動相不能有效分離時，可采用不同溶劑依次展開不同距離。展開距離一般為 1015 cm。 ?藥典規(guī)定：點(diǎn)樣基線距底邊 cm, 樣點(diǎn)直徑 24mm, 點(diǎn)間距離約為 cm。 ?特點(diǎn) ：適合于大量稀樣品溶液的噴加；條帶寬度不超過 2 mm，有利于改善分辨率；便于狹縫式光密度計掃描；要求薄層板強(qiáng)度高。 ?手工點(diǎn)樣工具：定容玻璃毛細(xì)管（ 1 –5 ul），微量注射器。 ?采用多次點(diǎn)加法，第二次點(diǎn)加時應(yīng)待前一次點(diǎn)加的溶劑揮發(fā)后再
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