高效液相色譜法(1)(已修改)
2025-05-12 18:03 本頁(yè)面
【正文】 第四章 高效液相色譜法 High Performance Liquid Chromatography 本章 要求⒈ 了解高效液相色譜法的優(yōu)缺點(diǎn)⒉ 了解高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu)⒊ 掌握常用檢測(cè)器的原理及應(yīng)用范圍定義：以液體作為流動(dòng)相的色譜法稱為液相色譜法高效液相色譜法（ HPLC）： 20世紀(jì) 60年代末 70年代技術(shù)： 高壓泵、高效固定相和高靈敏度檢測(cè)器特點(diǎn)：速度快、效率高、靈敏度高、操作自動(dòng)化一 、 概述 高效液相色譜法簡(jiǎn)介1． 高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法比較 ⑴ 高速： HPLC分離效率高，速度快，一次幾分鐘和幾十分鐘就可完成。色譜柱的壽命長(zhǎng)，可達(dá)兩年以上。⑵ 高效： HPLC高壓 (2~6 MPa)下操作，填料顆粒小 (2~50 ?m)，規(guī)則均勻的固定相，傳質(zhì)阻力小，柱效高 (N=4000~60000 塊 /m)，分離效率高。⑶ 高靈敏度： 現(xiàn)代高效液相色譜儀普遍配有高靈敏度檢測(cè)器，使分析靈敏度比經(jīng)典色譜有大提高（紫外檢測(cè)器最小檢測(cè)限可達(dá) 109 g；熒光檢測(cè)器最小檢測(cè)限可達(dá) 1011~1013 g。⑷ 高自動(dòng)化： HPLC進(jìn)樣量小 (X~X0 ?L)。帶有自動(dòng)進(jìn)樣裝置和工作站。2． 高效液相色譜法與氣相色譜法的比較⑴ 適用范圍 GC適用于沸點(diǎn)低、熱穩(wěn)定性好、中小分子量的化合物， HPLC不受此種限制。氣相色譜一般都在 較高溫度 下進(jìn)行，而高效液相色譜法則經(jīng)?？稍?室溫條件 下工作。⑵ 流動(dòng)相 GC流動(dòng)相僅運(yùn)載樣品，不起分離作用，但無毒，易于處理。而 HPLC流動(dòng)相除了運(yùn)載樣品外，還有分離作用，可改變流動(dòng)相組成，進(jìn)行有效的分離。但流動(dòng)相一般有毒，費(fèi)用高。⑶ 色譜柱 GC柱很長(zhǎng)，特別是毛細(xì)管柱可長(zhǎng)至幾十米至上百米，柱效很高 (理論塔板數(shù) N=104~106)。 HPLC柱較短，一般為15~25 cm，柱效 (理論塔板數(shù) N=103~104)，低于 GC柱。⑷ 檢測(cè)器 與 GC相比， HPLC檢測(cè)器種類較多。⑸ 制備色譜 GC難以制備樣品，因?yàn)檫M(jìn)樣量小，難以收集或被破壞。HPLC可進(jìn)行制備，即制備色譜。一 ﹑ 高效液相色譜儀的結(jié)構(gòu) 高效液相色譜儀一般 分為 4個(gè)主要 部分： 高壓輸液系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)和檢測(cè)系統(tǒng)。 此外還配有輔助裝置：如梯度洗脫、自動(dòng)進(jìn)樣及數(shù)據(jù)處理等。工作過程如下： 首先高壓泵將貯液器中流動(dòng)相溶劑經(jīng)過進(jìn)樣器送入色譜柱，然后從控制器的出口流出。當(dāng)注入欲分離的樣品時(shí)，流經(jīng)進(jìn)樣器貯液器的流動(dòng)相將樣品同時(shí)帶入色譜柱進(jìn)行分離，然后依先后順序進(jìn)入檢測(cè)器，記錄儀將檢測(cè)器送出的信號(hào)記錄下來，由此得到液相色譜圖。 數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)輸液系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng)檢測(cè)系統(tǒng)HPLC的系統(tǒng)組成數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1. 高壓輸液系統(tǒng)： 一般由儲(chǔ)液罐、高壓輸液泵、過濾器、壓力脈動(dòng)阻力器等組成，其中高壓輸液泵是核心部件。高壓泵應(yīng)滿足如下要求：? 流量恒定，無脈動(dòng)，并有較大的調(diào)節(jié)范圍。? 能抗溶劑的腐蝕，耐酸、耐堿。? 有較高的輸送壓力。一般分離， 104 Pa壓力；高效分離，要求達(dá)到 ~107 Pa的壓
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