高效液相色譜法(1)(編輯修改稿)
2025-05-27 18:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 直徑 10~25 ?m③ 化學鍵合固定相 化學鍵合相色譜柱 雖然可將固定液機械地涂附在上述表面多孔硅膠或全多孔硅膠上作固定相，但有許多缺點，因此現(xiàn)在多采用化學鍵合固定相。 化學鍵合固定相是在表面多孔或全多孔硅膠表面上利用化學反應法通過化學鍵把有機分子結(jié)合在載體表面。 鍵合類型：㈠ 疏水基團：如 C C18；㈡ 極性基團： 如丙氨基 (C3H6NH2)、氰乙基 (C2H4CN)；㈢ 離子交換基團，如陰離子交換（ NR3Cl）、陽離子（ SO3H）；鍵合途徑：① Si—O—C 鍵型② Si—O—Si—C 鍵型 (最常用 )③ Si—C 鍵型⑵ 流動相 正相色譜 極性：流動相 ﹤ 固定相 反相色譜 極性：流動相 ﹥ 固定相a 流動相純度要高，與 固定相不相溶 ， 不發(fā)生 化學反應b 價格便宜，毒性小，易于純化c 對試樣溶解度適宜，不發(fā)生沉淀d 粘度小e 與檢測器匹配極性順序：水 ﹥ 乙腈 ﹥ 甲醇 ﹥ 四氫呋喃 ﹥ 環(huán)己烷 ﹥ 煤油4. 檢測系統(tǒng) 在液相色譜中，有兩種基本類型的檢測器 :⑴ 溶質(zhì)性檢測器 ： 僅對被分離組分的物理或化學特性有響應，有紫外 UVD、熒光 FD、二極管陣列檢測器 DAD等。⑵ 總體檢測器：對試樣和洗脫液總的物理或化學性質(zhì)有響應，有示差折光檢測器 RID、電化學檢測器ECD、蒸發(fā)光散射檢測器 ELSD和質(zhì)譜檢測器 MSD等。 P65，表 43藥典中的液相色譜檢測器常用的檢測器 :(1) 紫外光度檢測器： 是一種選擇性濃度檢測器，僅對那些在紫外波長有吸收的物質(zhì)有響應。 作用原理：基于待測試樣對特定波長的紫外光有選擇性的吸收，試樣濃度與吸光度的關系服從比爾定律。 結(jié)構(gòu)：1－低壓汞燈 2－透鏡 3－遮光板 4－測量池 5－參比池 6－紫外濾光片 7－雙紫外光敏電阻現(xiàn)在多數(shù)采用氘燈作為紫外光源 燈 流動池 光電二極管RS 樣品入口Hg 254Zn 214Cd 229D2 可變UV 檢測 器To amplifier優(yōu)點：靈敏度高（最小檢測度 10–9 g/mL），對溫度和流速不敏感，可用于 梯度洗脫 ；缺點：只能用于對紫外光有吸收組分的測定，溶劑的選擇受限制。 在高效液相色譜中應用最廣，約占 70% 。適于梯度洗脫，對流動相速度變化不敏感，流動相組成的變化對檢測器響應幾乎無影響。 對于在紫外 可見光區(qū)無強吸收的組分，需要經(jīng)過衍生化，才可以用紫外檢測器，如糖類 、 氨基酸 、 類脂化物 。 不能用在紫外 可見光有吸收的溶劑作流動相。溶 劑 透過波長下限 溶 劑 透過波長下限水 180 n庚烷 197甲醇 210 環(huán)乙胺 200n丙醇二酸 205 四氯化碳 265乙腈 190 氯仿 245THF 230 苯 280丙酮 330 甲苯 285乙酸甲酯 260 二氯甲烷 232乙酸乙酯 260 四氯乙烯 280硝基甲烷
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