【文章內(nèi)容簡介】 截距為零） 時可用外標一點法定量，需點一種 濃度的對照品溶液。 C＝ F1A C為樣品的濃度或重量， A為樣品的峰面積， F1為直線的斜率或比例常數(shù) B 外標二點法 工作曲線不通過原點時，只能用外標二點法定 量，至少要點在同一薄層板上二種不同濃度的對照 品溶液 (或一種濃度兩種點樣量 ) 。 F1 和 F2都是通過測量隨行的對照品溶液的濃度（ C1和 C2）和 峰面積（ A1和 A2）求出，所以這種方法又叫 隨行標準法 。 21 FAFC ?? 第一節(jié) 吸附色譜法 ② 內(nèi)標法 本法與外標法的主要區(qū)別，在于用內(nèi)標法時面 積累計值為被測樣品和內(nèi)際物的面積之比。由于內(nèi) 標物與被測物的測定是在同 — 通道上，因此要求內(nèi) 標物的吸收波長接近被測物質(zhì)的吸收波長，并與被 測物質(zhì)的斑點要完全分開。因而， 內(nèi)標物的選擇比 較困難。 外標法 是更為常用的定量方法。 第一節(jié) 吸附色譜法 ? 六、高效薄層色譜 (HPTLC) 高效薄層色譜法是在七十年代中期由常規(guī) TLC 發(fā)展形成的，也稱毫微 (克 )量薄層色譜 (nano－ TLC)。 高效薄層色譜法具有快速、高效、靈敏的特點。 高效薄層色譜之所以能達到高效，主要取決于 吸附劑的性能及涂板、點樣和展開等微量操作技術(shù)。 高效薄層色譜法定量多用薄層掃描法。 第二節(jié) ? 將某種溶劑涂布在吸附劑顆粒表面或紙纖維 上，形成一層液膜，稱為 固定相 。 吸附劑顆粒或紙纖維稱為 支持劑 或載體、擔體 。 溶質(zhì)在固定相和流動相之間發(fā)生分配 ,各組分因 分配的不同而獲得分離。 色譜過程是物質(zhì)在相對運動的兩相間平衡分布 過程，若混合物中各組分的 分配系數(shù) K不同，那么 被流動相攜帶移動的速度就不等，由于差速遷移而 第二節(jié) 在分配色譜中，是用溶劑極性來描述分配作用 的。極性溶劑與極性溶質(zhì)之間有較強的分子間作用 力，而非極性溶劑與非極性溶質(zhì)之間也有較強的分 子間作用力，因此溶解度的“ 相似者相溶 ”經(jīng)驗規(guī)則 可用于分配色譜中。 第二節(jié) ? 在分配色譜法中載體只起負載固定相的作用。 對它的要求是惰性，沒有吸附能力，能吸留較大 量的固定相液體。載體必須純凈，顆粒大小均勻。 (1) 硅膠 (2) 硅藻土 (3) 纖維素 是紙色譜的載體，也是分配柱色譜常 第二節(jié) ? 分配色譜根據(jù)固定相和流動相的相對極性，可以分為兩類： 一類稱為正相分配色譜，其固定相的極性大于流動相， 即以強極性溶劑作為固定相，而以弱極性的有機溶劑作為流 動相；在正相分配色譜中，被分離成分中極性大的親水性成 分移動慢 , 另一類為反相分配色譜則相反，其固定液具有較小的極 性，而流動相則極性較大。在反相分配色譜中，被分離成分 的移動情況與正相分配色譜相反，即親脂性成分移動慢，在 水中溶解度大的成分移動快。 第二節(jié) ? 一般正相色譜法常用的流動相有石油醚、醇類、酮 類、酯類、鹵代烷類、苯等或它們的混合物。 反相色譜法常用的流動相則為正相色譜法中的固定 固定相與流動相的選擇，要根據(jù)被分離物中各組分 在兩相中的溶解度之比即分配系數(shù)而定?？上仁褂脤Ω? 組分溶解度大的溶劑為洗脫劑，再根據(jù)分離情況改變洗 脫劑的組成，即在流動相中加入一些別的溶劑，以改變 第二節(jié) ? (一 ) 用 硅膠、纖維素 等作載體時，可直接稱出一定量的 載體，再加入一定比例的固定液，混勻后按吸附劑裝柱 法裝入柱內(nèi)，也分干法和濕法兩種。 以 硅藻土 為載體，先把硅藻土放在大量的流動相 中，在不斷攪拌下，逐漸加入固定液，加入不宜太快， 加完后繼續(xù)攪拌片刻。然后填充柱，分批小量地倒入柱 中，用一端平整的玻璃棒把硅藻土壓實壓平，隨時把過 量的溶劑放出。待全部裝完后應得到一個均勻填好的色 第二節(jié) 2. 加樣的方法有三種： (1)被分離物配成濃溶液，用吸管輕輕沿管壁加到含 固定液載體的上端，然后加流動相洗脫； (2) 被分離物溶液用少量含固定液的載體吸附，待溶 劑揮發(fā)后，加在色譜柱載體的上端，然后加流動相 洗脫； (3)用一塊比色譜柱內(nèi)徑略小的圓形濾紙吸附被分離 物質(zhì)溶液，待溶劑揮發(fā)后，再加在色譜柱載體上， 第二節(jié) (二 ) 以濾紙作為載體，以構(gòu)成濾紙的纖維素所結(jié)合 水分為固定相，以水飽和的有機溶劑為展開劑的色 譜分析方法。 1. (1)濾紙的選擇 ① 濾紙的質(zhì)地要均勻，厚薄均一，紙面必須平整； ② 具有一定的機械強度，被溶劑潤濕后仍能懸掛； ③ 具有足夠的純度； ④要選擇纖維松緊適宜，厚薄適當，展開劑移動的速度適中的濾紙。 第二節(jié) (2)濾紙的處理 有時為了適應某些特殊化合物分離 的需要，可對濾紙進行處理，使濾紙具有新的性 能。例如多數(shù)生物堿在中性溶劑系統(tǒng)中分離，往往 產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象，如將濾紙預先用一定 pH值的緩沖溶 液處理就能克服。 反相紙色譜：將親脂性液層固定在濾紙上作為 固定相，水或親水性液層為流動相，即為反相紙色 譜。適用于一些親脂性強、水溶性小的化合物的分 離。 第二節(jié) 2 紙色譜的點樣方法與薄層色譜相似。 3 紙色譜最常用的展開劑是水飽和的正丁醇、正 戊醇、酚等。 第二節(jié) 4. 在展開前，先用溶劑蒸氣飽和容器內(nèi)部，或用 浸有展開劑的濾紙條貼在容器內(nèi)壁，下端浸入溶劑 中，使容器盡快地被展開劑所飽和。然后再將濾紙 紙色譜的展開方式，通常采用上行法，讓展開 劑借毛細管效應自下向上移動。 對于 Rf值較小的樣品，可以用下行法，借助于 重力使溶劑由毛細孔向下移動， 第二節(jié) 上行展開裝置 5 紙色譜的檢出方法和 TLC基本相同，但紙色譜不能 用腐蝕性顯色劑如硫酸等，對有抗菌作用的成分，可應 用生物檢定法，也可以用酶解方法。 第二節(jié) ? 吸附色譜主要適用于 親脂性物質(zhì) 的分離，對于 強極性物質(zhì)，如脂肪酸和多元醇等，在極性吸附劑 上分離很不理想，分配色譜的產(chǎn)生，使這些強極性 親水性物質(zhì)得到了很好的分離。 分配色譜法的優(yōu)點在于有較好的重現(xiàn)性，并可 根據(jù) K值預示分離結(jié)果。 第三節(jié) 離子交換色譜法 ? 概念：以離子交換劑為固定相，用水或與水混合的溶劑作為流動相，利用它在水溶液中能與溶液中離子進行交換的性質(zhì)，根據(jù)離子交換劑對各組分離子親合力的不同而使其分離的方法。 ? 離子交換劑可分為無機離子交換劑和有機離子交換劑，其中以有機離子交換劑在分離分析中應用最廣泛，種類