薄層色譜法ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-14 16:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 甲醇 乙二醇 甲酰胺 / 2022/2/11 27 ： ? 增加溶劑強度 ，使 Rf值增大，但也可能降低分離能力。 ? 流動相中較強組分的 體積比 小于 5%或大于 50%，選擇性最大，此時最有利于溶質(zhì)與流動相組分的選擇性相互作用。 ? 用乙醚或甲醇代替流動相中的一種較強組分，由于形成 氫鍵 可改善選擇性。 ? 若出現(xiàn)斑點拖尾，可向流動相中加少量水，或降低薄層活性 ，有利于改善分離。 ? 也可采用兩種強溶劑與一種弱溶劑組成的三元混合流動相 ，此時，溶劑強度由弱溶劑控制，而溶劑選擇性則由兩強溶劑控制。 2022/2/11 28 在 TLC中斑點的移動與擴散是二維的，因為斑點在展開方向和與之垂直方向上的擴散速度是不相等的，展開劑的移動速度也是不等的，在單位體積或單位質(zhì)量薄層內(nèi)所含的溶劑量越接近溶劑前沿減少得越明顯，直至溶劑前沿時為零，這一現(xiàn)象稱為 “ 溶劑的體積梯度 ” ，在各種展開形式中均存在。當然，對于這一問題實際上只是在定量斑點濃度時才需要考慮。 2022/2/11 29 ? 同時 一種成分的色譜行為會受到混合物中其他成分的影響 ，這種影響的大小取決于混合成分的種類、濃度、以及斑點間的距離等。這種影響一般使分配系數(shù)變小。如兩個相鄰斑點中后面的一個展開速度較其單獨展開時為大。 2022/2/11 30 在其他因素一定時，固定相活度增加， Rf值減少，反之亦然?？赏ㄟ^預吸附溶劑分子，調(diào)節(jié)其表面活性。例如可將活化薄層板放在相對濕度恒定的空間里來達到調(diào)節(jié)活度的目的。 ? 實際工作中常常使固定相預吸附一定量單一或混合溶劑蒸氣，預吸附量越大，溶劑前沿運動速度越快，物質(zhì)斑點的 Rf值越小。 ? 預吸附還可能影響 Rf在 。 2022/2/11 31 ? 在層析過程中發(fā)生的 邊緣效應 就是由于這種因素引起的。尤其是使用混合溶劑時，極性較弱和沸點較低的溶劑，在薄層邊緣容易揮發(fā)，使邊緣部分的展開劑中極性溶劑的比例增大， Rf相對增大。同一物質(zhì)在同一薄層板上出現(xiàn)中間部分的 Rf值比邊緣的 Rf值小 ，即邊緣效應，若在展開前先將展開槽與薄層板用 展開劑蒸氣飽和后再展開 ，邊緣效應可消失。采用雙槽層析缸尤為有利。 2022/2/11 32 預吸附中 展開中 展開過程中用不同于展開劑的溶劑調(diào)節(jié)槽內(nèi)氣氛 2022/2/11 33 薄層色譜法定性、定量方法 一 .定性方法 ?利用保留值 ?測定 Rf值 ?測定相對 Rf值，即 Rx值。 ?利用二維色譜（改變色譜條件，比較Rf值是否一致） s b1 b2 b2 s b1 s b1 b2 點樣 第一次展開 第二次展開 2022/2/11 34 ?通過板上光譜圖定性 ?直接測定薄層板上斑點的紫外或可見吸收光譜圖，與平行點加的標準斑點的圖譜對照。 ?可建立標準條件下的化合物的光譜圖庫，用計算機檢索定性。 ?與其他技術(shù)連用 ?TLC付里葉變換 IR聯(lián)用 ?TLCMS聯(lián)用 2022/2/11 35 二 .定量方法 ——將薄層分離后物質(zhì)斑點定量地洗脫下來，再對洗脫液定量。 ?分光光度法、 HPLC法、 GC法、質(zhì)譜法 ?斑點面積測量 ——用透明紙覆蓋在薄層表面，描出斑點界限，然后測量其面積。 ?目測法 ——比較系列標準與樣品的斑點面積大小、顏色深淺，得到樣品的含量范圍。 2022/2/11 36 ? 定量計算 ?外標法：此法是薄層定量最常用的方法。定量時，點樣量必須準確，樣品與對照品應點在同一塊薄層板上。用已知含量的對照品得出樣品含量的一種方法。 ?內(nèi)標法 :選一個純度高、化學性質(zhì)穩(wěn)定、在薄層上能與對照品分開的物質(zhì)作內(nèi)標物 ，并準確稱取加到被測物中，根據(jù)內(nèi)標物的質(zhì)量算出被測物的含量。 2022/2/11 37 ? 精密度 ? 重復性 ——當待測組分的含量達 ug/斑點時 , 方法的重復性 (RSD) 應在 %以內(nèi)。 ? 中間精密度 ——多數(shù)情況下， RSD應在 %以內(nèi)。 ? 再現(xiàn)性 ——RSD一般應在 10%以內(nèi)。 方法認證 ?選擇性 ——以分離度表示，待測組分的 Rf值在 – ?穩(wěn)定性 ——考察在采樣、樣品預處理、貯存、展開，展開后處理等過程中的樣品穩(wěn)定性。 ?線性與范圍 ——相應于待測組分檢出量的 20% 120%范圍。 ?靈敏度 ——通常以標準曲線的斜率表示。 2022/2/11 38 三 . 薄層掃描 : ?直接法 ——測定光照射色譜后，因被測物斑點的存在引起的透射光和反射光的變化。并通過隨行標準比較待測斑點的量。 ?間接法 ——將部分照射光的能量轉(zhuǎn)換成較長波長的熒光，即 熒光 測量。 ?薄層色譜定量測定的光學方法是基于測量斑點和薄層空白處光學響應信號的差值。 2022/2/11 39 ? 透射光法 ?測定組分對應的斑點對特定波長光的吸收度來確定含量。將薄層板從左至右移動，對斑點掃描，單色光透過薄層板后被記錄下來，將測得的吸收度對 Rf值繪制掃描曲線，得薄層色譜圖 光源 單色器 2022/2/11 40 ? 反射光法 ?一定波長的光照射薄層，穿進薄層內(nèi)的光部分被薄層吸收，部分經(jīng)過漫反射又折回表面成為反射光。當對薄層進行掃描時，測量其反射吸收度，可得到反射光譜。反射吸收度與物質(zhì)含量有確定關(guān)系，可進行定量。 光源 單色器 2022/2/11 41 ? 掃描方式 ?直線式掃描 ——照射
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