高效液相色譜法hplc(編輯修改稿)
2024-08-28 14:31 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 大，在含水介質(zhì)中，又要受到光、空氣、溫度和 pH的影響，使測(cè)定結(jié)果不理想。因而，提出用甲醇和水都能溶解的樟腦磺酸，作為離子對(duì)試劑，以二巰基丙烷磺酸鈉 ，能使被測(cè)樣品處于穩(wěn)定的初始狀態(tài)，結(jié)果更為可靠。 反相離子對(duì)色譜 是分離有機(jī)離子的有效方法，離子對(duì)試劑和其他添加劑的選用規(guī)則： — COOH,—SO3H基團(tuán)時(shí)，選用的離子對(duì)試劑應(yīng)是帶正電荷的有機(jī)銨鹽，以增加樣品陰離子在反響色偶中的保留值，選用的流動(dòng)相一般是甲醇 /水； 離子對(duì)試劑，還要加入磷酸鹽或者其他緩沖液，以控制流動(dòng)相的酸度； — NH2和 —NH基團(tuán)或其他陽(yáng)離子時(shí)，選用的離子對(duì)試劑應(yīng)是烷基磺酸鹽或硫酸鹽； — NH2， —COOH,— SO3H等不同性質(zhì)的基團(tuán)時(shí)則以上規(guī)則選用的離子對(duì)試劑和添加劑都合理。 舉例： 芳酸 及其 酯類(lèi)藥物 分析 合成氨基水楊酸鈉時(shí)，以間氨基酚為原料的生產(chǎn)路線較為普遍，因此在成品中可能含有未完全反應(yīng)的間氨基酚。 USP(24)采用離子對(duì)高效液相色譜法檢測(cè)間氨基酚的限量。 色譜條件：填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18,10um)；色譜柱為 250mmX46mm；流動(dòng)相為磷酸二氫鈉液 ()— 磷酸氫二鈉液()— 甲醇 (含氫氧化四丁基銨)(425:425:100)；檢測(cè)波長(zhǎng)為 254nm；流速為 。 離子色譜 離子色譜法是由離子交換色譜法派生出來(lái)的一種分離方法。由于離子交換色譜法在無(wú)機(jī)離子的分析和應(yīng)用受到限制。例如，對(duì)于那些不能采用紫外檢測(cè)器的被測(cè)離子，如采用電導(dǎo)檢測(cè)器，由于被測(cè)離子的電導(dǎo)信號(hào)被強(qiáng)電解質(zhì)流動(dòng)相的高背景電導(dǎo)信號(hào)掩沒(méi)而無(wú)法檢測(cè)。 為了解決這一問(wèn)題， 1975年 Small等人提出一種能同時(shí)測(cè)定多種無(wú)機(jī)和有機(jī)離子的新技術(shù)。他們?cè)陔x子交換分離柱后加一根抑制柱，抑制柱中裝填與分離柱電荷相反的離子交換樹(shù)脂。 陽(yáng)離子交換： R— H + Na+OH ＝ R— Na + H2O R— H + Na+Br ＝ R— Na + H+Br 陰離子交換： R— OH + Na+Br ＝ R— Br + Na+OH 使具有高背景電導(dǎo)的流動(dòng)相轉(zhuǎn)變成低背景電導(dǎo)的流動(dòng)相，從而用電導(dǎo)檢測(cè)器可直接檢測(cè)各種離子的含量。這種色譜技術(shù)稱(chēng)為離子色譜。 若樣品為陽(yáng)離子，用無(wú)機(jī)酸作流動(dòng)相，抑制柱為高容量的強(qiáng)堿性陰離子交換劑。 雙柱型離子色譜裝置圖 離子色譜連續(xù)抑制裝置圖 空間排阻色譜 原理：又稱(chēng)凝膠色譜法，主要用于較大分子的分離。與其他液相色譜方法原理不同，它不具有吸附、分配和離子交換作用機(jī)理，而是基于試樣分子的尺寸和形狀不同來(lái)實(shí)現(xiàn)分離的。 小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過(guò)，出峰最慢；中等分子只能通過(guò)部分凝膠空隙，中速通過(guò)；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。 固定相：凝膠 (具有一定大小孔隙分布 )；可對(duì)相對(duì)分子質(zhì)量在 103105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離 親和色譜 (AC) 原理： 利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離先在載體表面鍵合上一種具有一般反應(yīng)性能的所謂 間隔臂 (環(huán)氧、聯(lián)胺等 )，再連接上 配基 (酶、抗原等 ) 。 這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改變淋洗液后洗脫 薄層層析色譜 是色譜法的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固 — 液吸附色譜，它集柱色譜和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于少量樣品 (幾微克，甚至 )的分離；另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，因此又可用來(lái)精制樣品。此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。是將吸附劑、載體或其他活性物質(zhì)均勻涂鋪在平面板 (如玻璃板、塑料片、
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