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正文內(nèi)容

第二十章病原性真菌(編輯修改稿)

2024-08-28 13:10 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 勻 )、 圓形或卵圓形菌體或孢子及假菌絲 , 可確認(rèn)為假絲酵母菌感染 。 2)抗原檢測:取病人血清作 ELISA、 免疫印跡法等檢測白假絲酵母菌抗原 。 3)核酸檢測:用 PCR法將白假絲酵母菌 DNA分子擴增后以分子探針檢測,具有較好的敏性和特異性。 4)分離培養(yǎng) 將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上, 25℃ 或 37℃ 培養(yǎng) 1~4 d后,可出現(xiàn)奶油色類酵母型菌 落。鏡檢可見假菌絲和芽生孢子。 鑒定 1)芽管形成試驗:將假絲酵母菌接種于 ~|血清中 , 37℃ 孵育 ~4 h觀察有無芽管形成 。 白假絲酵母菌可形成芽管 , 其他假絲酵母菌不形成芽管 。 2)厚膜孢子形成試驗:將假絲酵母菌接種于玉米粉培養(yǎng)基 25℃ 孵育 12d后 , 白假絲酵母菌在菌絲頂端 、 側(cè)緣或中間形成厚膜孢子 。 3)糖同化或發(fā)酵試驗 凡發(fā)酵某種糖一定能同化該糖,故只需做 那些不發(fā)酵糖的同化試驗。將假絲酵母菌 接種糖發(fā)酵管, 25℃ 孵育,一般觀察 2~ 3d, 對不發(fā)酵或弱發(fā)酵管可延長至 10d或 2— 4周。 觀察有無酵母生長或液體培養(yǎng)基是否變混 濁。現(xiàn)在商品化的產(chǎn)色培養(yǎng)基可快速鑒定 白假絲酵母菌和其他假絲酵母菌。 (3)藥物敏感試驗:對二性霉素 B、 5FC等藥 物敏感 , 但對 5FC極易產(chǎn)生耐藥性 。 (4)抗體檢測:早期診斷可用 ELlSA夾心法 、 免疫酶斑點試驗 , 方法簡便 。 也可用乳膠 凝集試驗和對流免疫電泳試驗等檢測血清 中抗白假絲酵母菌抗體 。 (5)動物試驗:將假絲酵母菌懸液注射 1ml于家 兔耳靜脈或注射 , 假 絲酵母菌對動物無致病性 。 (二 )熱帶假絲酵母菌 廣泛分布于自然界,在人體表和外界相通的腔道中也存在。熱帶假絲酵母菌可引起皮膚、粘膜和內(nèi)臟假絲酵母菌病。它除可在粘膜細(xì)胞上增殖引起感染外,其產(chǎn)生的毒素可引起過敏反應(yīng)及產(chǎn)生的水解酶類引起組織損傷。 微生物檢驗 (1)直接顯微鏡檢查:將標(biāo)本作涂片革蘭 染色后鏡檢 , 觀察G +假絲酵母菌 。 (2)分離培養(yǎng)與鑒定:將標(biāo)本接種在沙氏 培養(yǎng)基上形成色暗而干燥的菌落 , 取 菌落作 TZC反應(yīng)。 TZC反應(yīng) 即在葡萄糖蛋白胨瓊脂內(nèi)加入 0. 05g/ L氯化 三苯基四氮唑 (TZC), 熱帶假絲酵母菌在此培 養(yǎng)基上生長后使培養(yǎng)基變?yōu)樯罴t色或紫色, 而白假絲酵母菌不使培養(yǎng)基變色 (淡紅 ),其 他假絲酵母菌使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。再取菌落 做糖發(fā)酵或同化試驗、芽管形成較遲 (血清中 6h以上 ),不形成厚膜孢子、動物試驗陰性。 二、隱球菌屬 包括 17個種和 7個變種,廣泛分布于自然界,人體體表、口腔和腸道中。外源性感染 , 經(jīng)呼吸道侵入,由肺經(jīng)血行播散 ,可侵犯肺、腦及腦膜、皮膚、骨和關(guān)節(jié)。好發(fā)于細(xì)胞免疫功能低下者,如 AIDS、惡性腫瘤、糖尿病、器官移植及大劑量使用糖皮質(zhì)激素者。 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn) 新生隱球菌、 淺白隱球菌和羅倫隱球菌有致病性。 (1 )微生物特性 在組織中呈圓形或卵圓形 , 直徑一般在 4~6μm , 外周有寬厚莢膜 , 莢膜較菌大 1~ 3倍 ,折光性強 , 一般染色法不易著色而難以發(fā)現(xiàn)而得名 。 常采用墨汁負(fù)染色法 , 在黑色景下可鏡檢到透亮菌體和寬厚莢膜 。 非致病性隱球菌無莢膜 。 (2)生物學(xué)多態(tài)性 ? 有 A、 B、 C、 D等 4個血清型,歸入兩個變種組:①新生隱球菌新生變種,有性階段為新生線黑粉菌,血清型為 A、 D;②新生隱球菌格特變種,有性階段為棒桿孢線黑粉菌,血清型為 B、 C。 ? 用含刀豆氨酸、甘氨酸、溴麝香草酚藍(lán)培養(yǎng)基可區(qū)分兩個種, B、 C型可使培養(yǎng)基由黃色變藍(lán)色,而 A、 D型則無此作用。在沙氏培養(yǎng)基上形成白色粘稠菌落。 (3 )微生物檢驗 (1) 標(biāo)本直接鏡檢:用病人腦脊液作墨汁負(fù)染色檢查是診斷隱球菌腦膜炎最簡便 、快速方法 。 常規(guī)細(xì)胞染色可發(fā)現(xiàn)隱球菌 ,但易誤診和漏診 。 如用 PAS染色后新生隱球菌呈紅色 。 (2)抗原檢測 用乳膠凝集試驗、 ELISA、 和單克隆抗體法等免疫學(xué)方法檢測隱球菌莢膜多糖特異性抗原,已成為臨床上的常規(guī)診斷方法,其中以乳膠凝集試驗最為常用,此法簡便、快速。特別對直接鏡檢和分離鑒定陰性者更有診斷價值。 ELISA敏感性和特異 性都較高。單克隆抗體法除有較高敏感性和特異性外,標(biāo)本無須稀釋和預(yù)先處理的優(yōu)點。 (3)核酸檢測 ? 可用痰液、支氣管吸出物等標(biāo)本核酸檢測方法有 DNA探針法、 PCR探針法等,用于檢測的探針、引物主要選自保守區(qū)的重復(fù)序列。 ? 可檢出新生隱球菌,并可區(qū)別類型,是新生變種還是格特變種。非致病性隱球菌不被檢出。 ? 此方法不受藥物治療的影響,還能正確評價臨床療效和預(yù)后等。 (4)分離培養(yǎng) ? 將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上 , 病原性隱球菌在 25℃ 和 37℃ 生長 , 而非病原性隱球菌在 37℃ 時不生長 。 培養(yǎng) 2—5d后觀察菌落形態(tài)特點 , 并取菌落作印度墨汁負(fù)染色鏡檢 。 (5 )鑒定 1) 酚氧化酶試驗:接種 L多巴枸櫞酸鐵和咖
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