高效液相色譜法藥大(已修改)
2025-06-07 22:11 本頁面
【正文】 第十三章 高效液相色譜法 第一節(jié) 概述 高效液相色譜法： 以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相 色譜實(shí)驗(yàn)和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法 一 、 HPLC與經(jīng)典 LC區(qū)別 二 、 HPLC與 GC差別 三 、 高效液相色譜儀流程圖 四 、 特點(diǎn) 一、 HPLC與經(jīng)典 LC區(qū)別 ? 主要區(qū)別：固定相差別 ， 輸液設(shè)備和檢測手段 1． 經(jīng)典 LC：僅做為一種分離手段 柱內(nèi)徑 1~3cm， 固定相粒徑 100μm 且不均勻 常壓輸送流動(dòng)相 柱效低 （ H↑， n↓） 分析周期長 無法在線檢測 2． HPLC：分離和分析 柱內(nèi)徑 2~6mm， 固定相粒徑 10μm（ 球形 ， 勻漿裝柱 ） 高壓輸送流動(dòng)相 柱效高 （ H↓， n↑） 分析時(shí)間大大縮短 可以在線檢測 二、 HPLC與 GC差別 ? 相同：兼具分離和分析功能 ， 均可以在線檢測 ? 主要差別：分析對(duì)象的差別和流動(dòng)相的差別 1． 分析對(duì)象 GC：能氣化 、 熱穩(wěn)定性好 、 且沸點(diǎn)較低的樣品 ， 高沸點(diǎn) 、 揮發(fā)性差 、 熱穩(wěn)定性差 、 離子型及 高聚物的樣品不可檢測 占有機(jī)物的 20% HPLC：溶解后能制成溶液的樣品 ， 不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制 分子量大 、 難氣化 、 熱穩(wěn)定性差及高分子 和離子型樣品均可檢測 用途廣泛 ， 占有機(jī)物的 80% 續(xù)前 2． 流動(dòng)相差別 ? GC：流動(dòng)相為惰性氣體 ? 組分與流動(dòng)相無親合作用力 ， 只與固定相作用 ? HPLC：流動(dòng)相為液體 ? 流動(dòng)相與組分間有親合作用力 ， 為提高柱的選擇性 、 改善分離度增加了因素 ， 對(duì)分離起很大作用 ? 流動(dòng)相種類較多 ， 選擇余地廣 ? 流動(dòng)相極性和 pH值的選擇也對(duì)分離起到重要作用 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相 可以增大分離選擇性 3． 操作條件差別 GC：加溫操作 HPLC：室溫；高壓 （ 液體粘度大 ， 峰展寬小 ） 三、高效液相色譜儀流程圖 1． 貯液罐 （ 濾棒 ， 可濾去顆粒狀物質(zhì) ） 2． 高壓泵 （ 輸液泵 ） 3． 進(jìn)樣裝置 4． 色譜柱 —— 分離 5． 檢測器 —— 分析 6． 廢液出口或組分收集器 7． 記錄裝置 續(xù)前 四 、 HPLC的特點(diǎn)和應(yīng)用 “三高 ” “ 一快 ” “ 一廣 ” 高柱效 ——n=104片 /米 ， 柱效高 （ 遠(yuǎn)高于一般 LC） 高靈敏度 高選擇性 分析速度快 應(yīng)用范圍廣泛 （ 可分析 80%有機(jī)化合物 ） 第二節(jié) 基本理論和條件選擇 熱
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