【正文】 風量罩是潔凈廠房設備工程常規(guī)必備的儀器。因此，潔凈廠房中的空氣平衡是一項非常重要并且技術性強調(diào)試復雜的工作。所以當風壓流向不對，應找出原因，才能 調(diào)整風閥。風量罩專用于測量送風和回風口的風量， 計數(shù) 單位為 m3/h。對于難以計算實際面積的，如百葉柵 的 散流器、擴散板，風量罩是惟一能精確測量的儀器。 四 激光粒子計數(shù)器 激光粒子計數(shù)器用于潔凈度檢測。我國 GMP（ 1998）第 75 條規(guī)定了“監(jiān)測潔凈室（區(qū)）的塵 粒 數(shù)和微生物數(shù)”。激光粒于計數(shù)器有手提式和臺式兩種規(guī)格。光散射粒子計數(shù)器的不足是，重量和體積較大， 13 使搬運不便，且不是等動力采樣。浮游菌測定需要專門的采樣器，其帶有真空抽氣泵，流量計、定時器等。 六 環(huán)境監(jiān)測儀表的校準 在藥品生產(chǎn)驗證過程中， HVAC 系統(tǒng)安裝確認、運行確認、性能確認等驗證方案都應規(guī)定環(huán)境監(jiān)測儀表的校準。 第六節(jié) 潔凈度測定 在 HVAC 系統(tǒng)驗證的程序中，潔凈度測定當屬于性能確認階段。國家技術監(jiān)督局 1996 年 4 月 10 日發(fā)布 GB/T 16292~ 16294 一 1996《醫(yī)藥 I 業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》。 懸浮粒子的測試方法所使用的儀器有：光散射粒子計數(shù)器（用于粒徑 ≥ m 的懸浮粒子計數(shù)）；濾膜顯微鏡（用于粒徑 ≥ 5μ m 的懸浮粒子計數(shù)）。使用儀器時應嚴格按照儀器說明書及 SOP 操作。 2）采樣管口置采樣點采樣時，在確認計數(shù)穩(wěn)定后方可開始連續(xù)讀數(shù)。 4） 采樣管的長度應根據(jù)儀器的允許長度，除另有規(guī)定外，長度不得大于 。 6） 必須按照儀器的檢定周期，定期對儀器做檢定，以保證測試數(shù)據(jù)的可靠性。潔 凈室（區(qū)）的溫度和相對濕度應與其生產(chǎn)及工藝要求相適應（濕度控制在 18~24℃ ，相對濕度控制在 45％ ~60%之間為宜）；空氣潔凈度不同的潔凈室（區(qū)）之間的壓差應 ≥ 5Pa，空氣潔凈度級別要求高的潔凈室（區(qū)）對相鄰的空氣潔凈度級別低的潔凈室（區(qū)）一般要求呈相對正壓。靜態(tài)測試 ( at rest test)是指潔凈室（區(qū)）凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)己處于正常運行狀態(tài)，工藝設備已安裝，潔凈室（區(qū)）內(nèi)沒有生產(chǎn)人員的情況下進行的測試。靜態(tài)測試時，室內(nèi)測試人員不得多于 2 人。測試時間：對單向流，測試應在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于 10min 后開始；對非單向流，測試應在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于 30min 后開始。 懸浮粒子潔凈度等 級驗證的采樣點最少數(shù)目可查表 (下表 )確定。 采樣點的位置，一般在離地面 高度的水平面上均勻布置；采樣點多于 5 個時，也可以在離地面 高度的區(qū)域內(nèi)分層布置．但每層不少于 5 點。每個采樣點的采樣次數(shù)可以多于 1 次， 且 不同采樣點的采樣次數(shù)可以不同。 2） 對于單向流，計數(shù)器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口宜向上。 4） 采樣時，測試人員應在采樣口的下風側。 式中， A 為某一采樣點的平均粒子濃度，粒 /m3； C 為某一采樣點的粒子濃度（ i＝ 1， 2， ? ，n），粒 /m3； N 為某一采樣點上的采樣次數(shù) 。 3） 標準誤差 ： 2 2 211A M ( A M + ( )S E =( 1 ) LAMLL? ? ??（ ） ） … 式中， SE 為平均值均值的標準誤差，粒／ m3。 UCL= M 十 t SE 式中， UCL 為平均值均值的 95%置信上限， 粒 /m 3； t 為 95%置信上限的 t 分布系數(shù)，見 下表。判斷懸浮粒子潔凈度級別應依據(jù)下述兩個條件： 1） 每個采樣點的平均粒子濃度必須低于或等于規(guī)定的級別界限，即 Ai≤ 級別界限。墓級別界限?；钗⑸餃y定的目的是確定浮游的生物微粒濃度和生物微粒沉降密度，以此來判斷潔凈室是否達到規(guī)定的潔凈度。 細菌很微小，人們的肉眼看不見。細菌培養(yǎng)時，由一個或幾個細菌繁殖而成的一個細菌團稱為 CFU（ colony forming unit，菌落形成單位），也稱 菌 落效。浮游菌與沉降菌的關系存在著以 下 近似公式： Ng= N Vs f T 式中， Ng為在 f 面 積上的細菌沉降數(shù) (CFU)； N 為空氣中的浮游菌濃度 (CFU/m 3）； Vs為含菌粒子沉降速度（ cm/s)； T 為沉降時間 (s)。浮游菌（ airbornc microbe）是用本標準提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。在適宜的生長條件下，將收集到的浮游菌讓其繁殖到可見的菌落 進 行計數(shù)，從而判定潔凈環(huán)境中單位體積空氣中菌落數(shù)的多少。 培養(yǎng)基自行配制方法可參見 YY/T 第 6 章無菌檢查部分中關于此類培養(yǎng)基的配備和操作步驟。 狹縫式采樣器由附加的真空抽氣泵抽氣，通過采樣器的縫隙式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋 轉的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落，予以計數(shù)。 狹縫式采樣器的使用要點： ①校驗。校驗的項目有：定時器、轉盤轉速、流量計。 ③空氣采樣量根據(jù)需要選定。 ④注意事項：采樣口必須用便于消毒及化學性能穩(wěn)定的材料制造；采樣管嚴禁滲漏，內(nèi)壁應光滑；采樣管的長度應根據(jù)測點的高度定，盡量減少彎曲；真空抽氣泵的排氣量應與采樣器匹況，宜采用無 油 真空抽氣泵，必要時可在排氣口安裝氣體過濾器，真空抽氣泵安裝的 16 位置必須適當，一般裝在采樣器下面。可根據(jù)所選用的采 樣器選擇合適的培養(yǎng)皿，狹縫式采樣器一般采用 Ф 150nim 15mm, Ф 90nim 15mm, Ф 65nim 15mm 三種規(guī)格的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。必須定期對恒溫培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。 采樣器進人被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于 100 級潔凈室的采樣器宜一直放在被測房間內(nèi)；用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面；采樣前，先用消毒劑消毒采樣器的頂蓋、轉盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉盤；采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌；若用消毒劑對采樣管的外壁及 內(nèi)壁進行消毒時，應將管中的殘留液倒掉并晾干；采樣者應穿戴與被測潔凈區(qū)域相應的工作服，在轉盤上放人或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手應用消毒劑消毒。 關閉真空泵，放人培養(yǎng)皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采樣器縫隙高度。 3)培養(yǎng)全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；在 3035℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于 48h；每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染。 4）菌落計數(shù)用肉眼直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用 510 倍放大鏡檢查是否有遺漏。 5)注意事項 ? 使用前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質、污染或破損的，不能使用。 ? 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細記錄。 測試規(guī)則 測試狀態(tài)有靜態(tài)和動態(tài)兩種，測試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報告中注明測試狀態(tài)。 測試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級別的工作服。 測試開始的時間：對單向流，如 100 級凈化房間及層流工作臺，測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 10min 后開始； 對非單向流，如 10000 級、 100000 級、 300000 級的凈化房間，測試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 30min 后開始。 17 最少采樣點數(shù)目表 面積（ S） m2 100 10000 100000 驗證 監(jiān)測 驗證 監(jiān)測 驗證 監(jiān)測 S10 23 1 2 1 2 — 10≤ S20 4 2 2 1 2 — 20≤ S40 8 3 2 1 2 — 40≤ S100 16 4 4 1 2 — 100≤ S200 40 — 10 — 3 — 200≤ S400 80 — 20 — 6 — 400≤ S 160 — 40 — 13 — 注： ，對于 100 級的單向流 潔凈 室（包括層流工作臺），指的是送風口面積；對于 l0000級、 I00000 級的非單向流潔凈室，指的是房間面積。 對每個 100 級潔凈操作區(qū)域（如層流罩、層流工作臺），可在離藥物敞開口處 30cm 設測點， 每 班 1 次。 采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。 潔凈室〔區(qū)）采樣點的布置力求均勻，避免采樣點在某局部區(qū)域過于集中或某局部區(qū)域過于稀疏。 采 樣點布置 參考圖 采樣量根據(jù)日常檢測及環(huán)境驗證確定，每次最小采樣量見 下 表 。 3） 采樣注意事項：①對于單向流或送風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流方向；對于非單向流，采樣管口向上；②布置采樣點時，至少應離開塵粒較集中的回風口 Im 以上；③采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側。測試報告的格 18 式如 下 表。 ① 每個測點的浮游菌平均濃度必須低于所選定的評定標準中關于細菌濃度的界限。 ②若某側點的 浮游菌平均濃度超過評定標準，則必須對此區(qū)域先行消毒，然后重新采樣2 次， 2 次側試結果必須合格。此處標準為 GB/T16294 1996《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌的測試方法》。此外，用擦拭法收集培養(yǎng)的建筑物表面（墻壁、地板、天花板等）以及操作人員衣著上的細菌亦屬于沉降菌測試的內(nèi)容。 沉降菌測定所用設備主要為高壓消毒鍋、恒溫培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿（ Ф 90mrn x 15mm 的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿）和培養(yǎng)基（普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或藥典認可的其他培養(yǎng)基）。 2）培養(yǎng) ： 全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于 3035℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于48h。 3） 菌落計數(shù) ： 用肉眼直接計數(shù)，標記或者菌落計數(shù)器上點計，然后用 510 倍放大鏡檢 19 查有否遺漏。 注意事項 測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性；采取一切措施防止人為對樣 本的污染；對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù) 做 詳細的記錄；由于細菌種類繁多，差別甚大 ， 計數(shù) 時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并須注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。沉降菌測試前，被測試潔凈室應經(jīng)過消毒，溫濕度應達到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。 3） 測試時間對單向流，如 100 級凈化房間及層流工作臺 ，測 試應在凈化空凋系統(tǒng)正常運行不少于 10min 后開始；對非單向，如 10000 級、 100000 級以上的凈化房間 ，測 試應在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運行不少于 30min 后開始。 可按 下 表 來確定。 最少培養(yǎng)皿數(shù)參考表 潔凈度級別 所需 Ф 90mm 的培養(yǎng)皿數(shù)（沉降 計） 100 14 10000 2 100000 2 5） 采樣點的位置可以同懸浮粒子測試點。 沉降菌測試法采樣點位置的詳細規(guī)則與浮游菌測試法的采樣點位置規(guī)則類同 。測試報告的編寫格式見 下 表 。 平均菌落數(shù)的計算： 12M nM M Mn? ? ?? …平 均 菌 落 數(shù) 式中， M 為平均菌落數(shù)； M1為 1 號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； M2為 2 號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； Mn為 n 號培養(yǎng)皿菌落數(shù)； n 為培養(yǎng)皿總數(shù)。 用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。 20 第七節(jié) 潔凈室消毒的驗證 制藥工業(yè)的潔凈室（特別是無菌藥品生產(chǎn)），不僅要控制空氣中一般的懸浮狀態(tài)的氣溶膠粒子，還要控制活微生物數(shù)。與控制廠房設施污染有關的主要是空氣與表面。制藥企業(yè)可以利用加熱（干熱、濕熱）、化學藥物 （ 如甲醛、環(huán)氧乙烷、臭氧） 射線（如紫外線燈照射）等方法，使空氣中細菌的蛋白質變性以滅菌；可以利用過濾介質（如各類空氣過濾器、高效過濾器）或靜電除塵法將空氣中塵埃、微生物粒子予以捕集截留。而在實際生產(chǎn)中，由于機器的運行、人員的進出，建筑物的表面均會產(chǎn)生塵粒，從而滋生細菌并極易再吹落；特別是人員的污染幾乎是 唯一 的細菌來源，一個人每小時約散發(fā) 1000 個死皮細胞（相當于 20 微米 大小的粒子〕，因此人身凈化必須 嚴格按 SOP 執(zhí)行（人手需經(jīng)消毒液浸泡或噴灑）； 無菌室的室內(nèi)建筑材料、設施設備等應能經(jīng)受藥物的消毒滅菌處理；潔凈服的質地應光滑、不產(chǎn)生靜電、不脫落纖維和顆粒性物質，也就是要選用不產(chǎn)生靜電或經(jīng)防靜電處理的材料；潔凈服的洗滌、干燥、整理，必須在潔凈室環(huán)境中進行，必要時應按要求滅菌（無菌衣必須經(jīng)高溫消毒滅菌）；物料、容器、設備、儀器進人無菌室應做嚴格的消毒滅菌處理；定期進行室內(nèi)消毒滅菌操作，等等，以使?jié)崈羰以趧討B(tài)狀態(tài)下也符合 GMP 的規(guī)定要求。定期進行室內(nèi)消毒滅菌需要時間，設備的清洗滅菌也需要時間，因 此潔凈室（特別是無菌室）一般不安排三班生產(chǎn)，每天必須有足夠時間用于清潔與消毒。而對于主要污染途徑的表面，常見的消毒滅菌方法有：紫外線燈照射，臭氧接觸，過氧乙酸、甲醛、乳酸等氣體熏蒸，消毒劑噴灑等。制藥企業(yè)必須制定清潔和滅菌的標準操作規(guī)程（ SOP），并定期進行驗證，以確證清潔與滅菌的有效性?！痹诟戒浺坏?4 點中強調(diào)了設備清洗是必要的驗證內(nèi)容之一。對于消毒滅菌需要驗證的內(nèi)容有：消毒條件、方法、所有介質、清潔劑、滅菌劑及濃度、消毒設備、消毒時間以及最后的環(huán)境監(jiān)測。 臭氧滅菌消毒的原理是：臭氧在常溫、常壓下分子結構不穩(wěn)定，很快自行分解為氧分子（姚）和單個氧原子（ O），后者具有很強的活性，對細菌有極強的氧化作用，臭氧氧化分解了細菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細胞膜，將細菌殺死。 稱無污染消毒劑。 生產(chǎn)臭氧的原料主要是空氣和電能，一般通過高頻臭氧發(fā)生器來制