核酸類藥物-在線瀏覽
2025-03-09 16:41本頁面
【正文】 （二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷酸 （二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷酸 ? 對(duì) 5 ’ IMP的生物合成來說，關(guān)鍵的酶是 PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶，利用 產(chǎn)氨短桿菌 直接發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷酸的關(guān)鍵： ? ①使用 腺嘌呤缺陷型 菌株。 ? ③選育 Mn2+不敏感性 變異株 ? ④菌本身的 5 39。 鳥苷酸鈉 是比肌苷酸鈉更強(qiáng)的增鮮劑，它還是三氮唑核苷和無環(huán)鳥嘌呤的原料，因此在食品工業(yè)和制藥行業(yè)中需求量很大。 （二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷酸 ? 黃苷酸 （ XMP）是鳥苷酸（ GMP）的前體產(chǎn)物，可以通過累積黃苷酸（ XMP），之后再用酶轉(zhuǎn)化法生產(chǎn)GMP。 ? 菌種 B： 5’核苷酸分解力微弱， GMP合成酶活性強(qiáng) . ? 控制 A、 B菌接種比例，混合培養(yǎng)，大量產(chǎn)生 XMP并高效轉(zhuǎn)化成 GMP。 ? 方法 ：將核苷懸浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，進(jìn)行磷酸化。 氯化氧磷 肌苷，懸浮于磷酸三乙酯中 肌苷酸（ IMP ） 0 ℃ 核苷的制備 ? 核苷 是多種核苷類藥物的原料，這些藥物通常是生物自身能夠合成的組成遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)類似物，目前已用于臨床的此類藥物有幾十種 ? 另外，核苷的 發(fā)酵法 生產(chǎn)水平大大高于同類結(jié)構(gòu)核苷酸的發(fā)酵水平，因此肌苷酸鈉，鳥苷酸鈉可分別由肌苷和鳥苷經(jīng) 化學(xué)磷酸化 方法合成，ATP由 腺苷酯法 合成。 （二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷 ? 發(fā)酵法生產(chǎn)核苷是近代發(fā)酵工程領(lǐng)域中的杰出成果，產(chǎn)率高，周期短，控制容易，產(chǎn)量大。 ? 枯草桿菌 的嘌呤核苷酸合成途徑。IMP脫氫酶 受最終產(chǎn)物 GMP及鳥嘌呤衍生物反饋抑制，SAMP合成酶 受 AMP反饋抑制的。 ? 而枯草桿菌的 腺嘌呤、 黃嘌呤缺陷型，當(dāng)培養(yǎng)基中提供 限量鳥嘌呤 時(shí)就累積腺苷。 ? 選育出從遺傳上解除正常代謝控制的理想菌株。 ? ②短小芽孢桿菌受 PO43的抑制。 ? ④提供的生長(zhǎng)因子腺嘌呤或酵母粉必須 亞適量 。 2．發(fā)酵法生產(chǎn)鳥苷和黃苷（ G， X） ? 鳥苷生產(chǎn)菌性狀 ：以肌苷產(chǎn)生菌為出發(fā)菌株，再增加德夸菌素抗性， 解除 GMP對(duì)酶 PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶 、 IMP脫氫酶 、 GMP合成酶 的反饋抑制 ? 黃苷生產(chǎn)菌性狀與鳥苷產(chǎn)生菌株相類似，關(guān)鍵是要 缺失 GMP合成酶 。 3．發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷（ A或 Ado） ? 腺苷產(chǎn)生菌遺傳性狀： ? ①腺嘌呤回復(fù)（ A+）； ? ②黃嘌呤缺陷（ Xn）； ? ③ AMP脫氨酶缺失； ? ④ GMP還原酶 (GMPred) 缺失； ? ⑤抗 8雜氮黃嘌呤（ 8AXr） ? 注意防止黃嘌呤缺陷型標(biāo)記的回復(fù)，保存期間斜面的反復(fù)移植是黃嘌呤回復(fù)，腺苷產(chǎn)量下降的主要原因。 ? 以 產(chǎn)氨短桿菌 為出發(fā)株，用 發(fā)酵法 直接產(chǎn)生 AMP或 GMP是很困難的。 ? 而使用 枯草桿菌 為出發(fā)株，其合成途徑經(jīng) IMP分成兩條環(huán)形途徑，只要阻塞某一代謝途徑，就能產(chǎn)生另一途徑相應(yīng)累積產(chǎn)物。是第一種被美國(guó) FDA批準(zhǔn)用于臨床的治療艾滋病 的新藥。 （一）疊氮胸苷（ AZT） ? 化學(xué)合成，起始原料是 胸苷 ，成本高。 ? 1990年 5月 《 新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志 》 發(fā)表了第 2個(gè)治療愛滋病的藥物，稱雙脫氧肌苷（ DDI），商品名稱 Videx，由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所于 1985年發(fā)現(xiàn)的。 ? DDI的抗病毒作用，是通過 減慢 HIV在人體細(xì)胞中的復(fù)制 （或繁殖）速度和在免疫系統(tǒng)中的擴(kuò)散（或傳播）速度。 （一）疊氮胸苷（ AZT） ? 后來，美國(guó)又批準(zhǔn)一個(gè)治療艾滋病的新藥，稱為 雙脫氧胸苷 （ DDS），是 HIV復(fù)制的抑制劑，可代替 AZT。 ? 臨床驗(yàn)證， DDS使 CD4細(xì)胞數(shù)目增多，延長(zhǎng)生存時(shí)間，減少致病菌感染的發(fā)病率，可作為抗 HIV的首選藥物。 或稱腺嘌呤阿拉伯糖苷 . （二）阿糖腺苷－ 作用與用途 ? 阿糖腺苷 是 廣譜 DNA病毒抑制劑 ，臨床上用于治療皰疹性角膜炎，單純皰疹病毒感染引起的腦炎和乙型肝炎，與 IFN一樣，能夠直接作用于病毒。 （二）阿糖腺苷 ? (1) 酶 —化學(xué)合成法 ? 以尿苷為原料經(jīng) 氧氯化磷 和 二甲基甲酰胺 反應(yīng)，生成氧橋化合物，在 堿性 水溶液中水解成阿糖尿苷，然后加入 尿苷磷酸化酶 ，使之生成阿糖 1磷酸，再加入 腺嘌呤 和 嘌呤核苷磷酸化酶 ，使轉(zhuǎn)化為阿糖腺苷 （二）阿糖腺苷 ? 酶法合成阿糖腺苷，選育了一株優(yōu)秀菌株產(chǎn)氣腸桿菌（ Enterbacteraerogens），能產(chǎn)生尿苷磷酸酶（ Upase）和嘌呤核苷磷酸化酶（ Pynpase），用菌株的休止細(xì)胞作為酶源從阿糖尿苷和腺嘌呤高效地合成阿糖腺苷。 （二）阿糖腺苷 ? (2) 以 5’AMP為原料的化學(xué)合成法 ? 將 5’AMP(Ⅰ )進(jìn)行選擇性的對(duì)甲苯磺?；磻?yīng) ,得到主要產(chǎn)物 2’O對(duì)甲苯磺酰基腺苷 5’單磷酸酯 (Ⅱ )。 (Ⅲ )再經(jīng)溴化反應(yīng) ,得 8’溴 2’O對(duì)甲苯磺?；佘?(Ⅳ )。 (Ⅴ )再在甲醇胺中進(jìn)行環(huán)化 ,得關(guān)鍵中間體 8,2’O環(huán)化腺苷 (Ⅵ )。 (Ⅶ )經(jīng)氫解脫硫 ,得到阿糖胞苷 (Ⅷ ).精制后 ,制成靜脈注射粉針劑 . （三）三氮唑核苷 ? 三氮唑核苷 又名利巴韋林（ ribavirin） ,商品名病毒唑，為 廣譜抗病毒藥物 。 （三）三氮唑核苷 ? 三氮唑核苷 的另一特點(diǎn)是 對(duì)病毒作用點(diǎn)多 ， 不易使病毒產(chǎn)生抗
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