核酸與核苷類藥物概述及合成工藝-在線瀏覽
2025-02-08 00:41本頁面
【正文】 易于提取RNA。 （ 2） 高 RNA含量酵母菌株的篩選 可以從自然界 篩選 到 RNA含量高的酵母菌株 ， 也可用 誘變育種 的方法提高酵母菌的 RNA含量 。 需用酸中和 PH7。 上法的缺點是制得的 RNA Mr較低 ,(磷酸單脂酶 、 磷酸二脂酶降解 RNA， 90 ℃ 保持 3－ 4h破壞酶 )。 要避免 分子降解 ， 可采用 苯酚法 制備 RNA。 脫氧核糖核蛋白 溶于 濃鹽溶液1mol/L,不溶于 ,而 核糖核蛋白 溶于 液 。 取 100g壓榨啤酒酵母 （ 含水份 70%） ， 加入 230ml含 NaOH 3g的水 ， 20℃ 以下緩慢攪拌 30分鐘 。 冷至 10℃ 以下 ， 6mol／ L HCl調 ，置冷過夜 ， 離心得 RNA （ 純度 80％ ） 。 如要制成固體狀 DNA， 在熱變性 DNA溶液中逐漸加入等體積 95％ 乙醇 ， 離心可獲得纖維狀DNA， 沉淀用乙醇 、 丙酮洗滌 ， 減壓低溫干燥得 DNA粗品 ， 產品含熱變性 DNA50％ ～ 60％ 。粗品 DNA溶于適量蒸餾水 ， 加入 5％ 十二烷基磺酸鈉 達 1／ 10體積 ， 攪拌 1小時 ， 經(jīng) 5000r／ pm離心 1小時 ， 清液中 加入 NaCl達1mol／ L， 再緩慢加入 冷 95%乙醇 ， DNA析出 ， 經(jīng)乙醇 、 丙酮洗滌 ， 真空干燥得具有生物活性的 DNA（ 活性 DNA制備需在 0～ 3℃操作 ） 。 酶解法生產 5‘— 單核苷酸工藝流程 ?雙酶法生產肌苷酸和鳥苷酸 （ I＋ G） 呈味核苷酸 的主要品種是 肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉 ，商品名簡稱為 （ I＋ G） ， 用 核酸酶 Pl降解 RNA可獲得GMP和 AMP， 其中 AMP經(jīng) 脫氨 生成 IMP。 ?菌體自溶法生產核苷酸 磷酸二酯酶 在合適的條件下降解細胞內的 RNA可產生 5′ 核苷酸 。 （ 1） 菌體自溶法生產核苷酸工藝流程： ? 堿水解法生產 2＇ ， 3＇ 混合核苷酸 RNA結構中的磷酸二酯鍵對于堿性條件不穩(wěn)定 ， 很容易生成 2′ ， 3 ＇ 環(huán)狀磷酸酯 ， 此環(huán)狀磷酸酯對堿更不穩(wěn)定 ，很易加水分解生成 2＇ ， 3＇ 混合核苷酸 。 ? 發(fā)酵法生產核苷酸 發(fā)酵法生產肌苷酸（ IMP） 肌苷酸鈉是一種高效增鮮劑，在谷氨酸鈉（味精）中加 2%，鮮度可增加 3倍。 產氨短桿菌嘌呤核苷酸生物合成途徑、代謝調控和肌苷酸發(fā)酵機制 : 積累 IMP的主要前提： （ 1）阻斷 SAMP合成酶 : 即選育缺該酶的菌株（嘌呤缺陷型），發(fā)酵前期提供適量腺嘌呤，以滿足菌體生長； （ 2）保持 PRA 合成暢通，即后期沒有多余腺嘌呤阻遏該步反應； （ 3）要使 IMP滲出胞外，選育對 Mn+不敏感菌株； （ 4）生成的 IMP不被降解，恰好原菌株該酶活力低。 （ 2）改變細胞對 GMP的透性 。 XMP轉化為 GMP菌株的條件 : (1)GMP不被分解 (2)GMP合成酶活力要強化 (抗生素激動劑 ) (3)增加細胞通透性 ? 半合成法制備核苷酸 由于 發(fā)酵法生產核苷 的產率很高， 核苷懸浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，進行磷酸化，從核苷生成 5′ 核苷酸收率可達 90%。 例二：鳥苷 2mmol／ L懸浮于 5ml磷酸三甲酯中 ， 溫度控制 0℃ ，添加氯化氧磷 6mmol／ L， 水 2mmo/L， 反應 6h， 5＇ GMP摩爾產率達 90%。 （ 1） 以核苷及其結構類似物 、 衍生物為主藥物多達幾十種； （ 2） 核苷類藥物在抗病毒 、 抗腫瘤 、 增強免疫方面占重要地位； （ 3） 核苷的發(fā)酵水平大大高于核苷酸 ， 所以常做后者的前體物質 。 共同特點： （ 1）使用磷酸單酯酶活力很強的枯草芽孢桿菌或短小芽孢桿菌為誘變出發(fā)菌株； （ 2）具有特定標記的有變株； （ 3）發(fā)酵培養(yǎng)時需提供限量生長因素。 ? 發(fā)酵法生產肌苷 （ 1）肌苷生產工藝 （ 2）發(fā)酵工藝條件： ? 碳源為葡萄糖 ? 保證充足的氮源 ? 磷酸鹽的影響 ? Mg+、 Ca+有促進作用 ? 生長因子腺嘌呤或酵母粉要亞適量 ? 最適發(fā)酵溫度為 3034℃ ， — ? 需大風量 ,高溶氧和低 CO2 發(fā)酵法生產肌酐的工藝流程 ? 發(fā)酵法生產鳥苷和黃苷 鳥苷產生菌的特征： （ 1）嘌呤核苷酸分解酶活力強； （ 2） SAMP合成酶， GMP還原酶缺失； （ 3）解除 AMP、 GMP對 PRPP轉酰胺酶，肌苷酸脫氫酶和 GMP合成酶的反饋抑制； ? 發(fā)酵法生產腺苷 以肌苷生產菌（枯草桿菌）為誘變基礎菌株。 第三節(jié) 核酸與核苷類藥物的制備舉例 （ 一 ） 疊氮胸苷 （ Azidothymidine， AZT） 結構與性質 AZT是 1987美國 FDA批準的治療 艾滋病 的新藥 。 生產工藝 此合成路線的起始 原料是胸苷 ， 目前主要是從 DNA水解法 制備 ， 由于原料來源少 ， 合成路線較復雜 ， 成本很
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