【正文】 沉淀 ， 如有沉淀 ， 應(yīng)于溶化后趁熱過濾 ， 滅菌后使用 。 包裝時 ，塞子必須塞緊 ， 以免松動或脫落造成染菌 。 ? 滅菌后的培養(yǎng)基在冷暗處保存?zhèn)溆?，放置時間不能過長，以免水分散失及染菌。 ? 勿用電爐直接熔化瓊脂培養(yǎng)基 ，以免營養(yǎng)成份過度受熱而破壞 。 ? 5 供試品抽樣 、 保存及檢驗量 ? 抽樣 ? 一般采用隨機抽樣方法 ， 抽樣量應(yīng)為檢驗用量 （ 2個以上最小包裝單位 ） 的 3倍量 （ 以備復(fù)試 ） 。 ? 凡能從藥品 、 瓶口 （ 外蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍 ） 外觀看出長螨 、 發(fā)霉 、 蟲蛀及變質(zhì)的藥品 ， 可直接判為不合格 ， 無需再抽樣檢驗 。 ? 供試品在檢驗之前 ， 應(yīng)保持原包裝狀態(tài) ， 嚴禁開啟 。 ? 檢驗量 ? 所有劑型的檢驗量均需取 2個以上包裝單位 （ 中藥蜜丸 、 膜劑 ，需取自 4丸 、 4片以上 ） 。 ? 液體制劑檢驗量為 10 ml。 ? 特殊貴重或微量包裝的藥品，檢驗量可酌減。 液體制劑采用原液者不得少于 6ml， 采用供試液者不得少 3ml， 外用藥品不得少5g。每次試驗所用物品必須事先計劃 ， 準備足夠用量 ， 避免操作中出入操作間 。 ? 開啟無菌室紫外殺菌燈和空氣過濾裝置，并使其工作不低于30min。 再用 %苯扎溴銨溶液或其他消毒液洗手或用乙醇棉擦手 ， 穿戴無菌衣 、 帽 、 口罩 、 手套 。 ? 供試液的制備 ? 液體供試品 取供試品 10ml，置滅菌錐形瓶中 ， 加入 90ml稀釋劑 ，搖勻 ， 作為 1:10供試液 。 ? 固體 、 半固體或粘稠供試品 稱取供試品 10g， 置于勻漿杯或適當滅菌容器中 ， 加入 100ml %無菌氯化鈉溶液 ， 用勻漿儀 （ 3000～5000r/， 2～ 4min） ， 振蕩器或乳缽研磨等方法分散混勻 。 1℃ 水浴中振搖 ， 腸溶膠囊加無菌磷酸鹽緩沖液后先打碎再置 45℃ 177。 ? 非水溶性供試品 軟膏劑、乳膏劑 稱供試品 5g（ 5ml）， 加入含已滅菌溶化并保溫 45℃ 左右的司盤 80 5g、 單硬脂酸甘油酯 3g、 聚山梨酯 80 10g混合物的燒杯中，用無菌玻棒攪拌均勻后，慢慢加入45℃ 左右的 %無菌氯化鈉溶液85ml， 邊加邊攪拌，使供試品充分乳化，作為供試液（ 1： 20）。 ? 栓劑 稱取供試品 10g， 置滅菌錐形瓶中 ， 加適量稀釋劑 ， 置 45℃ 水浴保溫 10min， 使溶 ， 加入無菌聚山梨酯 80 5～ 8ml， 振搖使之乳化 ，再加稀釋劑 （ 稀釋劑和聚山梨酯 80總量為 100ml） ， 搖勻 。 ? 以無菌注射器吸出全部藥液，按標示量補加稀釋劑至足量（若含非水溶性成份，加適量無菌聚山梨酯 80液）此液即為供試品原液。 1℃ 水浴保溫 ， 振搖使溶 。 ? 茶劑 取供試品 10g， 置滅菌錐形瓶中 ， 加入稀釋劑 100 ml， 振搖 30s， 以滅菌紗布過濾 （ 如為袋泡茶 ， 可直接取 2袋 ， 以稱樣結(jié)果按 1： 10加稀釋劑 ， 浸泡 30min） 。 ? 供試液的稀釋 （ 10倍遞增稀釋法 ） ? 取 2～ 3支滅菌試管，分別加入9ml滅菌稀釋劑（此時操作一般為：左手執(zhí)試管并將塞打開，傾斜，右手執(zhí) 10ml吸管吸量，注意：勿在乙醇燈焰峰正上方操作，以免燈焰將供試液中菌細胞殺滅）。 ? 另取 1支 1ml滅菌吸管吸 1：10均勻供試液 1ml， 加入裝有 9ml滅菌稀釋劑的試管中混勻 ， 即為 1：100供試液 。 每遞增 1稀釋級 ， 必須另換一支吸管 。吸液時，應(yīng)先吸至高于吸管上部刻度少許， 然后提起吸管， 貼于試管內(nèi)壁調(diào)整液量至刻度， 再沿第 2級稀釋管的內(nèi)壁靠近液面(勿接觸液面 )緩慢地吹出全部供試液(吸管內(nèi)應(yīng)無粘附或殘留液體 )，然后將吸管放入消毒液缸內(nèi)。 ? 同時作陰性對照 （ 待各級稀釋液注皿完畢后 ， 用 1支 1ml吸管吸取稀釋劑各 1ml， 分別注入 4個平皿中 。 ? 傾注培養(yǎng)基 將預(yù)先配制好的培養(yǎng)基 （ 細菌計數(shù)用營養(yǎng)瓊脂 ， 霉菌 、酵母菌計數(shù)一般用玫瑰紅納瓊脂 ，含蜂蜜 、 王漿液體制劑另加用 YPD瓊脂 ） 熔化 ， 冷至 45℃ 時 ， 傾注上述各個平皿 15ml， 以順時針或反時針方向快速旋轉(zhuǎn)平皿混勻 ， 注意 ，混勻時切勿將培養(yǎng)基濺到皿邊及皿蓋上 ， 置操作臺上待凝 。 霉菌 、 酵母菌計數(shù)平板于 25～ 28℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 72h。勿漏計細小的瓊脂層內(nèi)和平皿邊緣生長的菌落。必要時用放大鏡或用低倍顯微鏡直接觀察或挑取可疑物涂片鏡檢。 排除的方法需按該制劑微生物品種而定 ，并須觀察菌落特征及染色形態(tài) 。 為了有利于菌落計數(shù) ， 可在操作時將適宜稀釋級的供試液多增加注皿 （ 1～ 2個平皿 ） ， 注皿后不經(jīng)培養(yǎng)而放置于冰箱 （ 勿結(jié)凍 ） 中 ， 在計數(shù)菌落時作為對照 。 ? 有些軟膏等非水溶性供試品 ， 經(jīng)營養(yǎng)瓊脂注皿后呈乳白色 ， 培養(yǎng)后生長的菌落不易辨認和點計 ， 為防止這種情況 ， 也可用 %TTC營養(yǎng)瓊脂注皿 ， 經(jīng)培養(yǎng)后生長的菌落為紅色 ， 襯于白色背景上易于點計 。 ? 計錄各稀釋級平板的菌落數(shù) ， 求出各稀釋級 2或 3個平板菌落的平均數(shù) 。 超出以上范圍即視為操作誤差 ， 不得作為計數(shù)依據(jù) 。 ? 在 48h點計細菌 ， 72h點計霉菌時 ， 菌落極小不易辨認 ， 需延長培養(yǎng)時間 4～ 7天 ， 再點計菌落數(shù) 。 ? 供試品按營養(yǎng)瓊脂平板點計細菌菌落數(shù)；固體供試品按玫瑰紅鈉瓊脂平板點計霉菌數(shù) ， 一般液體供試品按玫瑰紅鈉平板點計霉菌及酵母菌總數(shù)；含蜂蜜及王漿的合劑按玫瑰紅鈉瓊脂平板點計霉菌菌落數(shù) ， 按 YPD瓊脂平板點計酵菌落數(shù) ，二者合并為霉菌及酵母菌數(shù) 。 ? 如只有 1個稀釋級平均菌落數(shù)在此30～ 300（ 30～ 100）之間，則將該稀釋級的菌落計數(shù)器乘以稀釋倍數(shù)報告（見附表例 ）。 當比值 ≤2時 ， 則以 2個稀釋級的平均菌落數(shù)均值報告 。 比值 = 高稀釋級平均菌落數(shù) 稀釋倍數(shù)