【正文】 0～ 100） 時 ， 則按比值計算 。 ? 對有疑議的供試品以 YPD培養(yǎng)基作酵母菌計數(shù)時 ， 可培養(yǎng)至 1周再點計菌落數(shù) 。當(dāng)菌落數(shù)在 15以上的同稀釋級二平板菌落數(shù)相差 1倍時 ， 該稀釋級菌落數(shù)不得作為計數(shù)依據(jù)；當(dāng) 2個平板菌落數(shù)均在 15（ 含 15） 以下時 ， 兩個平板菌落數(shù)的差值允許范圍為 0～ 4， 1～ 7， 29，3～ 10， 4～ 12， 5～ 14， 6～ 15。 ? 或用 %TTC營養(yǎng)瓊脂注皿 ， 經(jīng)培養(yǎng)后可將細(xì)菌菌落與其他有形物區(qū)別開來 。 ? 供試品如為微生物制劑 ， 應(yīng)將有效微生物菌落排除 ， 不可點計在細(xì)菌 、 霉菌和酵母菌數(shù)內(nèi) 。 ? 菌落計數(shù) ? 一般將平板置菌落計數(shù)器上或從平板的背面直接以肉眼點計，以透射光襯以暗色背景，仔細(xì)觀察。 其中 2個作細(xì)菌陰性對照；另二個作霉菌 、 酵母菌數(shù)陰性對照 ， 如另用YPD瓊脂測定酵母菌數(shù)時 ， 則再增加 2個平皿作酵母菌數(shù)陰性對照 ） 。 ? 在作 10倍遞增稀釋時， 吸管插入第 1級稀釋液內(nèi)不低于液面 ， 反復(fù)吸吹約 10次。加完稀釋劑后，試管塞應(yīng)立即塞上。 ? 西藥藥膜一般取樣為 10cm2， 制備供試液方法同上 。 ? 氣霧劑 將供試品置冰箱（ 4～８ ℃ ）１ h， 取出，用碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦拭供試品開啟部位周圍，然后以無菌鋼錐仔細(xì)鉆孔并插入容器中，勿移出鋼錐，以轉(zhuǎn)動方式使容器內(nèi)拋射劑全部拋出。 1℃ 水浴振搖溶解 。 ? 含王漿或蜂蜜的液體制劑和滴眼劑直接用供試品作為供試液 。 ? 操作人員用肥皂洗手 ， 關(guān)閉紫外殺菌燈 ， 進入緩沖間 ， 換工作鞋 。 ? 6 操作方法 ? 試驗前準(zhǔn)備 ? 將供試品及所有已滅菌的平皿 、 錐形瓶 、 勻漿杯 、 試管 、 吸管 （ 1 ml、10ml） 、 量筒 、 稀釋劑等移至無菌室內(nèi) 。 ? 膜劑除另有規(guī)定外 ， 中藥膜劑檢驗量為 30～ 50cm2， 化學(xué)藥及生化藥膜劑檢驗量為 10cm2。 包裝已開啟的樣品不得作為供試品 。 ? 抽樣時 ， 凡發(fā)現(xiàn)有異?；蚩梢傻臉悠?， 應(yīng)選取有疑問的樣品 ， 但機械損傷 、 明顯破裂的包裝不得作為樣品 。已熔化的培養(yǎng)基應(yīng)一次用完，開啟后不宜再用。 ? 培養(yǎng)基的分裝量不得超過容器的確 2/3， 以免滅菌時溢出 。 ? 75%乙醇溶液 ? 碘酊或碘伏溶液 ? 稀釋劑和試劑 ? %無菌 ? 氯化鈉溶液 (附錄 ) ? 無菌聚山梨酯 80 ? 無菌聚山梨酯 80氯化鈉溶液 (附錄 ) ? 無菌磷酸鹽緩沖液 () (附錄 ) ? 無菌 %氯化三苯四氮唑溶液 (TTC) (附錄 ) ? 4 培養(yǎng)基 ? 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 (附錄 ) ? 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基 (附錄) ? 酵母浸出粉胨葡萄糖 (YPD) 瓊脂培養(yǎng)基 (附錄 ) ? 培養(yǎng)基制備應(yīng)注意： ? 采用干燥培養(yǎng)基 ， 按說明配制 ， 應(yīng)對滅菌后的培養(yǎng)基 pH值進行校驗 。 也可用一次性無菌衣 、帽 、 口罩 、 手套 。 錐形瓶 、 量筒 、試管均應(yīng)加棉塞或硅膠塞 ， 再用牛皮紙包扎 。 ? 、 凈化工作臺 、 恒溫培養(yǎng)箱 （ 30～ 35℃ ） 、 生化培養(yǎng)箱（ 25～ 28℃ ） ， 微波爐 （ 或其他適宜加熱裝置 ） 、 康氏振蕩器 、 勻漿儀 （ 3000～ 8000r/min） 、 恒溫水浴 、 電熱干燥箱 （ 250～ 300℃ ） 、電冰箱 、 空調(diào) 、 高壓蒸汽滅菌器（ 使用時要進行滅菌效果檢查并應(yīng)定期請有關(guān)部門檢定 ） 。 ? 無菌室操作臺或凈化工作臺要定期檢測其潔凈度 ， 應(yīng)達到 100級 。 ? 沉降菌數(shù)測定 (Ⅱ 法 ) ? 無菌室操作臺消毒擦拭處理后，先啟動層流凈化裝置 30min， 將備妥的營養(yǎng)瓊脂平板 3個 (經(jīng) 30～ 35℃ 預(yù)培養(yǎng)48h， 證明無菌落生長。 ? 緩沖間內(nèi)應(yīng)有洗手盆 ， 無菌衣 、 帽 、 口罩 、 拖鞋等 。 ? 、 濕度 無菌室內(nèi)溫度和相對濕度直接影響紫外殺菌燈殺菌效果 ， 故溫度應(yīng)控制在 18～26℃ ， 相對濕度 40～ 60％ 。 操作間內(nèi)不應(yīng)安裝下水道 。 ? 設(shè)備 ? 無菌室 ? 2 設(shè)備 、 儀器及用具 ? 無菌室應(yīng)采光良好 、 避免潮濕 、 遠(yuǎn)離廁所及污染區(qū)（ 面積不超過 10m2， 高度不超過） 由緩沖間 （ 2個 ） 、 操作間組成 。不包括對營養(yǎng) 、 氧氣 、 溫度 、 PH和其他因素有特殊要求的細(xì)菌 、霉菌和酵母菌 。 微生物限度檢查法 江蘇省蘇州藥品檢驗所 細(xì)菌、 霉菌（酵母菌） 計數(shù) ? 1簡述 （ 微生物限度檢查的意義 ） ? 細(xì)菌 、 霉菌 、 酵母菌計數(shù)是檢測規(guī)定企業(yè)單位內(nèi)的非滅菌制劑污染的活菌數(shù)量 ， 是判定藥品受到微生物污染程度的重要指標(biāo) ，也是對生產(chǎn)企業(yè)的藥品 、 原料 、 輔料 、 設(shè)備器具 、 工藝流程 、 生產(chǎn)環(huán)境和操作者的衛(wèi)生狀況進行衛(wèi)生學(xué)評價的綜合依據(jù)之一 。 ? 測定結(jié)果只反映在規(guī)定條件下所生長的細(xì)菌 （ 一群在營養(yǎng)瓊脂上發(fā)育的嗜中溫 、 需氧和兼性厭氧菌 ） 、 霉菌和酵母菌的菌落數(shù) 。 微生物檢驗項目 ：細(xì)菌總數(shù)測定、 霉菌與酵母菌總數(shù)測定、控制菌檢驗（包括大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、沙門菌、金黃葡萄球菌、破傷風(fēng)梭菌）以及活螨的檢驗。 墻與地面及墻壁 、 天花板連接處應(yīng)呈凹弧形無縫隙 ， 不留死角 。 不符合要求的紫外殺菌燈應(yīng)及時更換 。 潔凈度不應(yīng)低于是 10000級 ， 局部凈化度為 100級 ， 或放置同等級凈化工作臺 ， 并準(zhǔn)備藥物天平 ， 乙醇燈 ， 火柴 ， 乙醇棉 ， 大 、 小橡皮乳頭等 。 潔凈室（區(qū)）空氣潔凈度級別表 潔凈度級別 塵粒最大允許數(shù) /立方米 ≥ ≥5μm 百級 3， 500 0 萬級 350， 000 2， 000 十萬級 3， 500， 000 20， 000 三十萬級 10， 500， 000 60， 000 級別 微生物最大允許數(shù)