【正文】 換氣次數 /小時 浮游菌 /立方米 沉降菌 / 皿 百級 5 1 /秒 萬級 100 3 20 十萬級 500 10 15 三十萬級 — 15 ? 浮游菌數測試方法 （ 參照中人民共和國國家標準GB/T162931996） 。 3個平板生長的平均菌落數不超過 1個。開動層流凈化裝置，同時用紫外殺菌燈照射 30min。 ? 玻璃器皿用前應洗滌干凈 ， 無殘留抗菌物質吸管口上端距 入約 2cm的適宜疏松棉花 ， 置吸管桶內或牛皮紙袋中 。 ? 無菌衣 、 帽 、 口罩 、 手套（ 洗凈后配套 ， 用牛皮紙包嚴 ） 滅菌 ， 備用 。 ? 5%石碳酸溶液 (配好后裝入玻璃消毒缸內 ， 供消毒帶菌吸管用 ) 亦可選用其他適宜消毒液 。 ? 配制的培養(yǎng)基不應有沉淀 ， 如有沉淀 ， 應于溶化后趁熱過濾 ， 滅菌后使用 。 ? 滅菌后的培養(yǎng)基在冷暗處保存?zhèn)溆?，放置時間不能過長，以免水分散失及染菌。 ? 5 供試品抽樣 、 保存及檢驗量 ? 抽樣 ? 一般采用隨機抽樣方法 ， 抽樣量應為檢驗用量 （ 2個以上最小包裝單位 ） 的 3倍量 （ 以備復試 ） 。 ? 供試品在檢驗之前 ， 應保持原包裝狀態(tài) ， 嚴禁開啟 。 ? 液體制劑檢驗量為 10 ml。 液體制劑采用原液者不得少于 6ml， 采用供試液者不得少 3ml， 外用藥品不得少5g。 ? 開啟無菌室紫外殺菌燈和空氣過濾裝置，并使其工作不低于30min。 ? 供試液的制備 ? 液體供試品 取供試品 10ml，置滅菌錐形瓶中 ， 加入 90ml稀釋劑 ，搖勻 ， 作為 1:10供試液 。 1℃ 水浴中振搖 ， 腸溶膠囊加無菌磷酸鹽緩沖液后先打碎再置 45℃ 177。 ? 栓劑 稱取供試品 10g， 置滅菌錐形瓶中 ， 加適量稀釋劑 ， 置 45℃ 水浴保溫 10min， 使溶 ， 加入無菌聚山梨酯 80 5～ 8ml， 振搖使之乳化 ，再加稀釋劑 （ 稀釋劑和聚山梨酯 80總量為 100ml） ， 搖勻 。 1℃ 水浴保溫 ， 振搖使溶 。 ? 供試液的稀釋 （ 10倍遞增稀釋法 ） ? 取 2～ 3支滅菌試管，分別加入9ml滅菌稀釋劑（此時操作一般為：左手執(zhí)試管并將塞打開，傾斜，右手執(zhí) 10ml吸管吸量，注意：勿在乙醇燈焰峰正上方操作，以免燈焰將供試液中菌細胞殺滅）。 每遞增 1稀釋級 ， 必須另換一支吸管 。 ? 同時作陰性對照 （ 待各級稀釋液注皿完畢后 ， 用 1支 1ml吸管吸取稀釋劑各 1ml， 分別注入 4個平皿中 。 霉菌 、 酵母菌計數平板于 25～ 28℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 72h。必要時用放大鏡或用低倍顯微鏡直接觀察或挑取可疑物涂片鏡檢。 為了有利于菌落計數 ， 可在操作時將適宜稀釋級的供試液多增加注皿 （ 1～ 2個平皿 ） ， 注皿后不經培養(yǎng)而放置于冰箱 （ 勿結凍 ） 中 ， 在計數菌落時作為對照 。 ? 計錄各稀釋級平板的菌落數 ， 求出各稀釋級 2或 3個平板菌落的平均數 。 ? 在 48h點計細菌 ， 72h點計霉菌時 ， 菌落極小不易辨認 ， 需延長培養(yǎng)時間 4～ 7天 ， 再點計菌落數 。 ? 如只有 1個稀釋級平均菌落數在此30～ 300（ 30～ 100）之間，則將該稀釋級的菌落計數器乘以稀釋倍數報告（見附表例 ）。 比值 = 高稀釋級平均菌落數 稀釋倍數 低稀釋級平均菌落數 稀釋倍數 ? 如有 3個稀釋級平均菌落數均在 30～ 300 (30～ 100)之間時 ， 則以后2個稀釋級計算級間比值報告 (同)， (見附表例 )。 如供試品原液平板均未生長霉菌及酵母菌 ， 報告未檢出霉菌及酵母菌 /ml。 以 3份低稀釋級供試液菌落數的平均值乘以稀釋倍數報告 。 ? 7． 注意事項 ? 供試品檢驗全過程必須符合無菌技術要求 。 ? 為避免細菌菌落蔓延生長 ， 宜采用下列方法處理： ? 開蓋干燥 將已凝固的瓊脂平板開蓋 ， 倒置斜放于凈化工作臺上 ， 開機 1～ 2h后合蓋 ， 放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)； ? 換陶瓦蓋 將已凝固的瓊脂平板蓋換上新近干熱滅菌的陶瓦蓋 。 ? 如營養(yǎng)瓊脂平板生長的霉菌 、 酵母菌數或玫瑰紅鈉瓊脂平板生長的細菌菌落數超過該品種微生物限度規(guī)定時 ， 經復試 2次 ， 如 3次結果的平均值仍超過規(guī)定 ， 應判供試品不合格 。 ? 大腸埃希菌是人和溫血動物腸道內的棲居菌 ， 隨糞便排出體外 。 ? 用 4 甲基傘形酮葡糖苷酸 （ 4 MethylumbelliferylβDglucuronide，即 MUG） 和靛基質 （ Indole） 試驗檢查大腸桿菌是一項新技術 ， 其檢驗步驟為：增菌培養(yǎng)后 ， 轉種 MUG蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng) ， 多數情況下不需要從混合菌中分離單個菌 ， 如 MUG、 Indole試驗為陽性或陰性即可報告結果 ， 如 MUG與 Indole試驗不一致時 ， 則需分離培養(yǎng) 、 革蘭染色 、 鏡檢及生化試驗鑒別 。 ? 單一的 MUG鑒別大腸桿菌其漏檢率達 6%， 鑒于 98%的大腸桿菌靛基質試驗為陽性 ， 故將 MUG靛基質試驗結合 ， 用 EMB瓊脂平板分離 ， 輔以 IMViC試驗 ， 在理論上可使大腸桿菌的檢出率達 99%。 ? 此外，由于藥品在生產過程中，常受到加熱、干燥等加工步驟的影響，藥品中污染的沙門菌可受到損傷或呈休眠狀態(tài)，故須在增菌培養(yǎng)前先進行預增。 ? 銅綠假單胞菌按增菌，分離、純培養(yǎng)、革蘭染色鏡檢及生化試驗等步驟進行檢驗。 ? 金黃色葡萄球菌檢查按增菌 、 分離 、純培養(yǎng) 、 革蘭染色鏡檢和血漿凝固酶試驗等步驟進行 。 其生活習性各異 ， 分為自由生活和寄生生活兩種類型 。能引起皮炎及消化系統(tǒng) 、 泌尿系統(tǒng) 、呼吸系統(tǒng)等的疾病 。 3 滴加碘液，媒染 1min， 水洗，以濾紙吸干余水。大腸桿菌為革蘭陰性短桿菌，或球桿菌狀，亦有桿菌狀。 b 培養(yǎng)物的菌齡以 16～ 2