【正文】 YPD培養(yǎng)基作酵母菌計(jì)數(shù)時(shí) ， 可培養(yǎng)至 1周再點(diǎn)計(jì)菌落數(shù) 。 ? 如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在300（ 100） 以上 ， 則按最高稀釋級(jí)平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告；如各稀釋級(jí)平均菌落數(shù)均在 30以下 ，則按最低稀釋級(jí)平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告 （ 見附表 ） 。 ? 結(jié)果報(bào)告 ? 菌落數(shù)在 100以內(nèi)時(shí) ， 按實(shí)有數(shù)據(jù)報(bào)告 。 ? 加 TTC 于傾注培養(yǎng)基前，在每 1000ml營(yíng)養(yǎng)瓊脂內(nèi)加入滅菌 1% TTC溶液 1ml（ 最終濃度為 %），混勻后傾注平皿。 ? 在藥品中檢出大腸桿菌 ， 表明該樣品受到人和溫血?jiǎng)游锏募S便污染 ，即可能污染腸道病原體 。 ?三 、 沙門菌檢查法 ? 1. 簡(jiǎn)述 ? 沙門氏菌屬是腸桿菌科的重要致病菌 ，沙門菌分 5個(gè)亞屬 ， 包括常見的傷寒 、甲型副傷寒 、 乙型副傷寒 、 丙型副傷寒 、 鼠傷寒 ， 豬霍亂等沙門菌在內(nèi) ，迄今已發(fā)現(xiàn) 2023多個(gè)菌型 。 五、金黃色葡萄球菌檢查法 ? 1 簡(jiǎn)述 ? 金 黃 色 葡 萄 球 菌 （ Staphylococcus aureus） 為葡萄球菌屬中的一種 ， 廣泛分布于自然界 ， 空氣 、 土壤 、 水及物品上 ， 人和動(dòng)物皮膚及與外界相通的腔道中 ， 也經(jīng)常有本菌存在 。 在土壤 、 池沼 、 江河和湖海里 ， 動(dòng) 、 植物體上 ， 貯藏食品和藥品中 ， 都可能有它們的存在 。 4 滴加 95%乙醇，脫色 20～ 30S，水洗。培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)的革蘭陽(yáng)性菌易成紅色。染色反應(yīng)難于判斷，菌細(xì)胞形態(tài)難于觀察。 2 滴加結(jié)晶紫染液，染色 1min， 水洗。 種類繁多 ， 分布甚廣 。 ? 本菌是常見的化膿性感染菌 、 在燒傷 、 燙傷 ， 眼科及其他外科疾患中常引起繼發(fā)感染 ， 由于本菌對(duì)許多抗菌藥物具有天然的耐藥性 ， 增加了治療的難度 、 國(guó)內(nèi)外藥典均將銅綠假單胞菌檢查列為檢查項(xiàng)目之一 。 ? MUG被 GUD水解 ， 產(chǎn)生熒光 ， 由于熒光反應(yīng)的敏感度較顏色反應(yīng)強(qiáng)行千萬倍 ， 易于觀察 ， 沒有主觀性 ，因而用 MUG鑒定大腸桿菌已被廣泛應(yīng)用于臨床 、 食品 、 飲水 、 污水等的檢測(cè) 。 埃希菌屬除大腸埃希菌外 ， 新近發(fā)現(xiàn)有非脫羧埃希菌等四個(gè)種 。 ? 供試液稀釋及注皿時(shí)應(yīng)取均勻的供試液 ， 以免造成實(shí)驗(yàn)誤差 。 ? 5個(gè)或 5個(gè)以上平板點(diǎn)計(jì)的菌落之和 ， 即為每 1ml菌落計(jì)數(shù)器 ， 共得3 組數(shù)據(jù) 。 當(dāng)比值＞ 2時(shí) ， 則以低稀釋級(jí)的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告 （ 見附表附 ） 。 ? 在下列情況下、點(diǎn)計(jì)菌落時(shí)間需提前或延長(zhǎng)培養(yǎng)時(shí)間： ? 菌落生長(zhǎng)呈蔓延趨勢(shì)者 ， 細(xì)菌點(diǎn)計(jì)需在 24h， 霉菌點(diǎn)計(jì)需在 48h作初步點(diǎn)計(jì) （ 點(diǎn)計(jì)霉菌菌落時(shí) ， 動(dòng)作宜輕 ， 勿反復(fù)翻轉(zhuǎn)平板或造成震動(dòng) ， 使早期形成的孢子散落在平板的其他部位 ， 又萌生新的霉菌菌落 ，導(dǎo)致計(jì)數(shù)誤差 ） 。 ? 供試品稀釋液常含有不溶性原料 、 輔料 ， 培養(yǎng)基注皿后可能產(chǎn)生沉淀物 ， 經(jīng)過培養(yǎng)后有時(shí)形成數(shù)量很多且難與菌落肉眼相鑒別的有形物 。 ? 培養(yǎng) 細(xì)菌計(jì)數(shù)平板倒置于 30～35℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48h。 以此類推 ， 根據(jù)供試品污染程度 ， 可稀釋至 1： 10 1：10 1： 104等適宜稀釋級(jí) （ 至少共 3級(jí) ） 。 ? 膜劑 中藥膜劑一般取 30～50cm2， 將藥膜剪成碎片 ， 置滅菌錐形瓶中 ， 加入稀釋劑 100ml， 于45177。 胃溶膠囊加稀釋劑后置 45177。 編號(hào)后將全部外包裝 （ 牛皮紙 ） 去掉 。 ? 固體及半固體 (粘稠性供試品 )制劑檢驗(yàn)量為 10 g。 應(yīng)用水浴或微波爐加熱 。 試劑規(guī)格應(yīng)為化學(xué)純以上的試劑 。 ? 用具 ? 大 、 小橡皮乳頭 （ 放于干凈帶蓋的容器中 ， 并應(yīng)定期用 70%～75%乙醇溶液浸泡 ） 。 ? 無菌室應(yīng)在每次操作前、后均用０ .1%苯扎溴銨溶液或其他消毒液擦拭操作臺(tái)及可能污染的死角。 ? 級(jí) 別 及 檢 查方法 通常采用塵 粒 數(shù) 及 浮 游 菌 數(shù) 或 沉 降 菌 數(shù)測(cè) 定 法。 緩沖間和操作間均應(yīng)設(shè)置紫外線殺菌燈 （ ２～２ .5W/m3） ，紫外殺菌燈應(yīng)距實(shí)驗(yàn)臺(tái)面高度不超過1M， 并應(yīng)定期檢查輻射強(qiáng)度 ， 不得低于 （ １ M距離 ） 。 因此供試品中所測(cè)的菌落數(shù)實(shí)際為菌落形成單位數(shù) （ colony forming unit ，CFU） ， 而不應(yīng)理解為細(xì)菌 、 霉菌 、酵母菌的個(gè)數(shù) 。 細(xì)菌 、 霉菌 、 酵母菌計(jì)數(shù)均采用平板菌落計(jì)數(shù)法 ， 這是活菌計(jì)數(shù)方法之一 ， 也是目前國(guó)際上許多國(guó)家常用的一種方法 。 ? 操作間與緩沖間之間應(yīng)有樣品傳遞箱，出入操作間和緩沖間的門不應(yīng)直對(duì)。 操作間或凈化工作臺(tái)的潔凈空氣應(yīng)保持對(duì)環(huán)境形成正壓 、 不低于 。 )以無菌方式（或經(jīng)傳遞箱）移入操作間，置凈化臺(tái)左、中、右各 1個(gè)，開蓋，暴露30min后將蓋蓋上。 ? 儀器及器皿 ? 2 . 2 . 1 菌落計(jì)數(shù)器 、 顯微鏡（ 1500X） 、 電子天平或藥物天平（ 感量 ） ， pH系列比色計(jì) 。 ? 接種環(huán) (白銥金或鎳鉻合金 ， 環(huán)徑 4～ 5mm、 長(zhǎng)度 6～ 10cm)、乙醇燈 、 乙醇棉球或碘伏棉球 、 滅菌剪刀或滅菌手術(shù)刀和滅菌鑷子 、滅菌鋼錐 、 滅菌稱樣紙 、 不銹鋼藥匙 、 試管架 、 火柴 、 記號(hào)筆 、 白瓷盤 、 洗手盆 、 陶瓦蓋 （ 12cm） 、 實(shí)驗(yàn)記錄紙等 。 包裝時(shí) ，塞子必須塞緊 ， 以免松動(dòng)或脫落造成染菌 。 ? 凡能從藥品 、 瓶口 （ 外蓋內(nèi)側(cè)及瓶口周圍 ） 外觀看出長(zhǎng)螨 、 發(fā)霉 、 蟲蛀及變質(zhì)的藥品 ， 可直接判為不合格 ， 無需再抽樣檢驗(yàn) 。 ? 特殊貴重或微量包裝的藥品，檢驗(yàn)量可酌減。 再用 %苯扎溴銨溶液或其他消毒液洗手或用乙醇棉擦手 ， 穿戴無菌衣 、 帽 、 口罩 、 手套 。 ? 非水溶性供試品 軟膏劑、乳膏劑 稱供試品 5g（ 5ml）， 加入含已滅菌溶化并保溫 45℃ 左右的司盤 80 5g、 單硬脂