蛋白質的提取ppt課件-在線瀏覽
2025-06-20 06:15本頁面
【正文】 必須將這種蛋白質從組織細胞中分離、純化出來。 二、蛋白質分離和純化 ? 研究蛋白質的結構、性質和功能，首先需要得到純的蛋白質樣品。 ? (3)分離和純化過程都必須在溫和的條件下進行。常用的方法有研磨法、超聲波法和酶解法等。 ? 水溶性蛋白 用 中性緩沖溶液（透析液） 抽提， 酸性蛋白 用 稀堿性溶液 抽提， 脂溶性蛋白 用 有機溶劑 抽提等。 ? (4)提純 ：可用層析法、電泳法等進行提純。 1．蛋白質的分離步驟 血紅 蛋白提取和分離步驟 具體操作 步驟 （一） （二） （三） （四） 血 液 血 漿 水 分 固體物質 血漿蛋白 無機鹽 磷 脂 葡萄糖等 血細胞 白細胞 血小板 紅細胞 （ 最多 ） 血紅蛋白 （ ） 90％ 血液組成成分 洗滌的目的： 洗去血液中血漿及血小板等中的 雜蛋白 洗滌過程： 血液 100mL 3g檸檬酸鈉 低速離心 2 min 紅細胞 血 漿 吸出血漿 紅細胞 5倍體積 生理鹽水 緩慢攪拌 10min 重復洗滌 3次，直至上清液沒有 防止破壞紅細胞，使血紅蛋白流失 （一）樣品處理 黃色 2. 血紅蛋白的釋放 原理：紅細胞滲透作用吸水漲破，釋放血紅蛋白 分離過程： 紅細胞 混合液 離心管 甲苯層 脂類物質 血紅蛋白層 破碎物沉淀層 高速離心 10min 濾紙 過濾 脂類物質 沉淀物 燒杯 分液 漏斗 20mmol/L磷酸緩沖液 透析的目的是什么？ 1mL 1mL 去除血紅蛋白中的小分子雜質 （二）粗分離 —— 透析血紅蛋白 ★注意事項★ （ 1）生理鹽水作用？ （ 3）兩次離心的差異？ （ 4）透析袋的作用機理？ 模擬紅細胞生存環(huán)境，保持紅細胞結構完整。 前慢后快，前短后長。 凝膠是 微小的多孔性球體 ，如 葡聚糖或瓊脂糖 。 混合物 上 柱 洗 脫 大分子流動快 小分子流動慢 收 集 大分子 收 集 小分子 1）原理： 不同蛋白質的 帶電性質 （正電荷或負電荷） 、電量、形狀和大小 不同，在電場中受到的作用力 大小、方向、阻力 不同，導致不同蛋白質在電場中的 運動方向 和 運動速度 不同。 由 弱酸 和相應的 強堿弱酸鹽 溶解于 水 中 。 抵制外界酸堿對溶液 pH的干擾而保持 pH穩(wěn)定。 熟悉血清中蛋白分類以及電泳分離操作。 在一定 pH條件下，不同的蛋白質由于具有不同的等電點而帶不同性質的電荷，因而在一定的電場中它們的移動方向和移動速度也不同，它們的電泳遷移率不同。該膜具有均一的泡沫狀的結構，厚度約為 120μ m，有很強的通透性，對分子移動阻力很小。 【 實驗器材 】 1. DYY6C型 雙穩(wěn)定時電泳儀和 DYYⅢ 型電泳槽 （ 2 cm 8cm）： 1片 /人。 ：載玻片 。 ：一個 /組。 【 實驗操作 】 用鑷子取出浸透的薄膜，夾在兩層粗濾紙內 吸干 多余的緩沖液，迎光判斷光面與 無光澤面 。要求薄膜 緊貼 濾紙橋并 繃直 ，中間不能下垂。 ： 電泳完畢后將薄膜取下 , 放在含氨基黑 10B染色液的培養(yǎng)皿中浸泡 35 min ：
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