《蛋白質(zhì)的提取》ppt課件-文庫(kù)吧
2025-04-18 06:15 本頁(yè)面
【正文】 濾法、萃取法等處理，得到蛋白質(zhì)粗制品。 ? (4)提純 ：可用層析法、電泳法等進(jìn)行提純。 ? (5)成品加工：測(cè)定蛋白質(zhì)的性質(zhì)并干燥成成品。 1．蛋白質(zhì)的分離步驟 血紅 蛋白提取和分離步驟 具體操作 步驟 （一） （二） （三） （四） 血 液 血 漿 水 分 固體物質(zhì) 血漿蛋白 無(wú)機(jī)鹽 磷 脂 葡萄糖等 血細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板 紅細(xì)胞 （ 最多 ） 血紅蛋白 （ ） 90％ 血液組成成分 洗滌的目的： 洗去血液中血漿及血小板等中的 雜蛋白 洗滌過(guò)程： 血液 100mL 3g檸檬酸鈉 低速離心 2 min 紅細(xì)胞 血 漿 吸出血漿 紅細(xì)胞 5倍體積 生理鹽水 緩慢攪拌 10min 重復(fù)洗滌 3次，直至上清液沒(méi)有 防止破壞紅細(xì)胞，使血紅蛋白流失 （一）樣品處理 黃色 2. 血紅蛋白的釋放 原理：紅細(xì)胞滲透作用吸水漲破，釋放血紅蛋白 分離過(guò)程： 紅細(xì)胞 混合液 離心管 甲苯層 脂類物質(zhì) 血紅蛋白層 破碎物沉淀層 高速離心 10min 濾紙 過(guò)濾 脂類物質(zhì) 沉淀物 燒杯 分液 漏斗 20mmol/L磷酸緩沖液 透析的目的是什么？ 1mL 1mL 去除血紅蛋白中的小分子雜質(zhì) （二）粗分離 —— 透析血紅蛋白 ★注意事項(xiàng)★ （ 1）生理鹽水作用？ （ 3）兩次離心的差異？ （ 4）透析袋的作用機(jī)理？ 模擬紅細(xì)胞生存環(huán)境，保持紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整。 破碎紅細(xì)胞；溶解細(xì)胞膜 釋放血紅蛋白。 前慢后快，前短后長(zhǎng)。 滲透作用 （ 2）蒸餾水和甲苯的作用？ ? 離心沉降法 ? 凝膠色譜法 ? 萃取法 ? 層析法 ? 電泳法 （三）純化 （ 1）原理： （ 2）材料：凝膠 大分子通過(guò)多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快； 小分子穿過(guò)多孔凝膠顆粒的內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。 凝膠是 微小的多孔性球體 ，如 葡聚糖或瓊脂糖 。內(nèi)部有許多貫穿的 通道 . 根據(jù)相對(duì) 分子質(zhì)量的大小 分離蛋白質(zhì)的方法 概念： 凝膠色譜法純化蛋白質(zhì) 洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液， 促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)。 混合物 上 柱 洗 脫 大分子流動(dòng)快 小分子流動(dòng)慢 收 集 大分子 收 集 小分子 1）原理： 不同蛋白質(zhì)的 帶電性質(zhì) （正電荷或負(fù)電荷） 、電量、形狀和大小 不同，在電場(chǎng)中受到的作用力 大小、方向、阻力 不同，導(dǎo)致不同蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的 運(yùn)動(dòng)方向 和 運(yùn)動(dòng)速度 不同。 電泳： 帶電粒子在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過(guò)程 （四）純度鑒定 — 電泳 2）電泳結(jié)果分析 如果出現(xiàn)一個(gè)條帶：樣品中含有 一個(gè)分子質(zhì)量級(jí)別 多肽； 如果出現(xiàn)兩個(gè)條帶：樣品中含有 兩個(gè)分子質(zhì)量級(jí)別 多肽。 由 弱酸 和相應(yīng)的 強(qiáng)堿弱酸鹽 溶解于 水 中 。 如 H2CO3/NaHCO3， NaH2PO4/Na2HPO4等 3） 緩沖溶液－－洗脫劑 作用： 配制： 調(diào)節(jié)酸和鹽的用量 ， 可配制不同 pH的緩沖液 。 抵制外界酸堿對(duì)溶液 pH的干擾而保持 pH穩(wěn)定。
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