電泳技術(shù)方王楷ppt課件-在線瀏覽
2025-06-18 18:13本頁面
【正文】 QX ? 質(zhì)點的前移同樣要受到阻力（ f ）的影響，對于一個球形質(zhì)點，服從 Stoke定律，即： f ＝ 6π r ην（ r為質(zhì)點半徑， η為介質(zhì)粘滯系數(shù)， ν為質(zhì)點移動速度） ? 當(dāng)質(zhì)點在電場中作穩(wěn)定運動時： F＝ f 即： QX＝ 6π rην 遷移率 u：單位電場強度下的電泳速度， 粒子的遷移率在一定條件下決定于粒子本身的性質(zhì)即其所帶電荷及大小和形狀。 電場強度 X為單位距離 L（ 單位為 cm） 內(nèi)電勢差 E（ 單位為伏特 ） ， 即 X＝ E/L。 影 響 因 素 1. 待分離大分子的性質(zhì) ： 所帶的電荷、分子大小和形狀，分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快 2. 緩沖液 pH和離子強度 ： pH值距離其等電點愈遠，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大 ；但是 pH過高或過低引起蛋白變性，緩沖液通常要保持一定的離子強度；強度過低，則緩沖能力差，不易維持 PH恒定，離子強度過高，在待分離分子周圍形成較強的帶相反電荷的離子擴散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使電泳速度減慢。 3. 電場強度 ： 過高 ，產(chǎn)熱，樣品和 Buffer擴散增加，條帶增寬；蛋白變性。當(dāng)需要增大電場強度以縮短電泳時間時，需附有冷卻裝置 4. 電滲 ： 在 電場中液體對固體支持物的相對移動；當(dāng)電滲方向與電泳方向一致時，會加快顆粒泳動速度，反之，當(dāng)兩者方向相反時，會減慢顆粒泳動速度。 按 支持介質(zhì)形狀 不同可分為： ⑴ 薄層電泳 ； ⑵ 板電泳 ； ⑶ 柱電泳 聚丙烯酰胺電泳（ PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠由單體丙稀酰胺和 N, N’ 甲叉雙丙烯酰胺在加速劑和催化劑 （ 四 甲基 乙 二 胺 ， T E M E D ） 作用下交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。分子量和構(gòu)型不同的蛋白質(zhì)分子，通過一定孔徑的凝膠時所受阻力不同，引起泳動速度的變化，從而達到分離目的。在電場作用下，可在醋酸纖維膜上分離成。電泳結(jié)束后，將醋酸纖維膜置于染色液。將染色后的區(qū)帶分別剪開，將其溶與堿液，進行比色測定，計算各區(qū)帶的百分?jǐn)?shù)。在膜的 無光澤面 距一端 2cm 處點樣（膜不 能折；在膜
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