《電泳技術(shù)方王楷》ppt課件-預(yù)覽頁
【正文】 凈電荷量（ Q）與電場強度（ X）的乘積。電泳（ electrophoresis） 電泳的基本原理 帶電的膠?；虼蠓肿釉谕饧与妶鲋?， 向帶相反電荷的電極作定向移動的現(xiàn)象稱為電泳 。 因此 ， 在一定時間內(nèi)各組分移動的距離不同 ， 從而達到分離鑒定各組分的目的 。 電場強度 X為單位距離 L（ 單位為 cm） 內(nèi)電勢差 E（ 單位為伏特 ） ， 即 X＝ E/L。 3. 電場強度 ： 過高 ，產(chǎn)熱，樣品和 Buffer擴散增加，條帶增寬；蛋白變性。 按 支持介質(zhì)形狀 不同可分為： ⑴ 薄層電泳 ； ⑵ 板電泳 ； ⑶ 柱電泳 聚丙烯酰胺電泳（ PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠由單體丙稀酰胺和 N, N’ 甲叉雙丙烯酰胺在加速劑和催化劑 （ 四 甲基 乙 二 胺 ， T E M E D ） 作用下交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。在電場作用下，可在醋酸纖維膜上分離成。將染色后的區(qū)帶分別剪開，將其溶與堿液，進行比色測定，計算各區(qū)帶的百分數(shù)。 2 、 電泳 將膜無光澤面向下，點樣端置于陰極，膜與電極緊密 接觸（ 不能留有氣泡 ），平衡 5min 。 4 、定量 1 ） 取 6 支試管并編號 ， 分別 加入 N 氫 氧 化 鈉 4 ml 。 蛋白質(zhì)名稱 等電點 分子量 清蛋白 69000 α α1－ 202200 α2－ 300000 β 90000 － 150000 γ － 156000 － 300000 血清在 p H8 . 6 的緩沖體系中電泳 1h 左右 ， 染色 后 可 顯示 5條 帶 。 當?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一 pH時，蛋白質(zhì)解離成正、負離子的趨勢相等，成為兼性離子，凈電位為零，此時溶液的 pH稱為蛋白質(zhì)的等電點。 操作步驟及注意要點 凝膠配制 ： a 取 10 ，從一端量出 7cm作好標記，用橡皮片封底（ 用兩條橡皮圈扎緊 ），垂直放置。上槽注入 5%H3PO4， 下槽注入 2%NaOH，檢查凝膠管上下口內(nèi)有無氣泡 ，如有必須排除。 測 量 樣 品 pI 直接用 pH試紙插入所需測定的蛋白區(qū)帶中測量
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