電泳技術(shù)方王楷ppt課件(更新版)
【正文】 100 ％ + 白蛋白 (A) α1 α2 β γ 血清蛋白的 pI 大多在 7 . 5 以下，在 p H8 . 6 的巴比妥緩沖液中以負(fù)離子形式存在，并且蛋白質(zhì)的分子量、立體構(gòu)象、等電點(diǎn)及形狀也有差異，在電場(chǎng)中遷移速度不同，可以在醋酸纖維薄膜上分離成 A 、 α 1 、 α 2 、 β 、 γ 五條區(qū)帶。 血紅蛋白的pI 約在 6 . 9 ，細(xì)胞色素 C 的 pI 為 10 . 5 ，兩者的 pI 相差較大，可以得到較好的分離?？克鲏毫⒛z與玻璃管分開，最后可用吸耳球在一端輕輕施壓，將其取下。 b 按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) page 17 配制凝膠液（ 按順序，每加一種試劑后都要輕輕充分搖勻， TEMED最后才加入，加入搖勻后要立即灌膠 ），用長滴管吸取配好的凝膠液，沿玻璃管注入至7 ml標(biāo)記平面，緩緩注入， 避免產(chǎn)生氣泡 。 清 蛋白 泳 動(dòng) 最 塊 ， 其 余 依次 α α β 、 γ 球 蛋白 。通電，電壓 100V, 時(shí)間 1 h 。 A、 α α β 、 γ 五條區(qū)帶。 過低 ，電泳時(shí)間增加，擴(kuò)散。 ? 在電場(chǎng)中，推動(dòng)帶電質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)的力（ F）等于質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量（ Q）與電場(chǎng)強(qiáng)度（ X）的乘積。 因此 ， 在一定時(shí)間內(nèi)各組分移動(dòng)的距離不同 ， 從而達(dá)到分離鑒定各組分的目的 。 3. 電場(chǎng)強(qiáng)度 ： 過高 ，產(chǎn)熱，樣品和 Buffer擴(kuò)散增加，條帶增寬；蛋白變性。在電場(chǎng)作用下，可在醋酸纖維膜上分離成。 2 、 電泳 將膜無光澤面向下，點(diǎn)樣端置于陰極，膜與電極緊密 接觸（ 不能留有氣泡 ），平衡 5min 。 蛋白質(zhì)名稱 等電點(diǎn) 分子量 清蛋白 69000 α α1－ 202200 α2－ 300000 β 90000 － 150000 γ － 156000 － 300000 血清在 p H8 . 6 的緩沖體系中電泳 1h 左右 ， 染色 后 可 顯示 5條 帶 。 操作步驟及注意要點(diǎn) 凝膠配制 ： a 取 10 ，從一端量出 7cm作好標(biāo)記，用橡皮片封底（ 用兩條橡皮圈扎緊 ），垂直放置。 測(cè) 量 樣 品 pI 直接用 pH試紙插入所需測(cè)定的蛋白區(qū)帶中測(cè)量
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