電泳技術(shù)方王楷ppt課件(專業(yè)版)
【正文】 操作步驟及注意要點(diǎn) 凝膠配制 ： a 取 10 ，從一端量出 7cm作好標(biāo)記，用橡皮片封底（ 用兩條橡皮圈扎緊 ），垂直放置。 2 、 電泳 將膜無光澤面向下，點(diǎn)樣端置于陰極，膜與電極緊密 接觸（ 不能留有氣泡 ），平衡 5min 。 3. 電場強(qiáng)度 ： 過高 ，產(chǎn)熱，樣品和 Buffer擴(kuò)散增加，條帶增寬；蛋白變性。 ? 在電場中，推動(dòng)帶電質(zhì)點(diǎn)運(yùn)動(dòng)的力（ F）等于質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷量（ Q）與電場強(qiáng)度（ X）的乘積。 A、 α α β 、 γ 五條區(qū)帶。 清 蛋白 泳 動(dòng) 最 塊 ， 其 余 依次 α α β 、 γ 球 蛋白 。靠水流壓力將膠與玻璃管分開，最后可用吸耳球在一端輕輕施壓，將其取下。 5 、 計(jì)算 總 吸 光 度 光 密度 總和 T ＝ A ＋ α 1 ＋ α 2 ＋ β ＋ γ 各 部分 蛋白 質(zhì) 的 百分?jǐn)?shù) ： 蛋白質(zhì) ％ ＝ A / T 100 ％ + 白蛋白 (A) α1 α2 β γ 血清蛋白的 pI 大多在 7 . 5 以下，在 p H8 . 6 的巴比妥緩沖液中以負(fù)離子形式存在，并且蛋白質(zhì)的分子量、立體構(gòu)象、等電點(diǎn)及形狀也有差異，在電場中遷移速度不同，可以在醋酸纖維薄膜上分離成 A 、 α 1 、 α 2 、 β 、 γ 五條區(qū)帶。 影響因素： 1 、聚丙烯酰胺凝膠孔徑的大小 2 、緩沖系統(tǒng) 3 、離子強(qiáng)度 血 清 蛋 白 醋 酸 纖 維 薄 膜 電 泳 目的： 原 理： 血清蛋白在 ，分子大小、形狀各有差異。 由于混合物中各組分所帶電荷性質(zhì) 、 電荷數(shù)量以及分子量的不同 ， 在同一電場的作用下 ， 各組分泳動(dòng)的方向和速度也各異 。當(dāng)需要增大電場強(qiáng)度以縮短電泳時(shí)間時(shí)，需附有冷卻裝置 4. 電滲 ： 在 電場中液體對固體支持物的相對移動(dòng)；當(dāng)電滲方向與電泳方向一致時(shí)，會加快顆粒泳動(dòng)速度，反之，當(dāng)兩者方向相反時(shí)，會減慢顆粒泳動(dòng)速度。 3 、染色 電泳結(jié)束，將膜放入氨基黑 10B 染色， 3min 后取出， 漂洗，反
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