電泳技術方王楷ppt課件(已修改)
2025-05-13 18:13 本頁面
【正文】 電泳（ electrophoresis） 電泳的基本原理 帶電的膠?；虼蠓肿釉谕饧与妶鲋?， 向帶相反電荷的電極作定向移動的現(xiàn)象稱為電泳 。 生物分子都帶電荷 ， 其電荷的多少取決于分子性質(zhì)及其所在介質(zhì)的 pH及其組成 。 由于混合物中各組分所帶電荷性質(zhì) 、 電荷數(shù)量以及分子量的不同 ， 在同一電場的作用下 ， 各組分泳動的方向和速度也各異 。 因此 ， 在一定時間內(nèi)各組分移動的距離不同 ， 從而達到分離鑒定各組分的目的 。 ? 在電場中，推動帶電質(zhì)點運動的力（ F）等于質(zhì)點所帶凈電荷量（ Q）與電場強度（ X）的乘積。 F＝ QX ? 質(zhì)點的前移同樣要受到阻力（ f ）的影響，對于一個球形質(zhì)點，服從 Stoke定律，即： f ＝ 6π r ην（ r為質(zhì)點半徑， η為介質(zhì)粘滯系數(shù)， ν為質(zhì)點移動速度） ? 當質(zhì)點在電場中作穩(wěn)定運動時： F＝ f 即： QX＝ 6π rην 遷移率 u：單位電場強度下的電泳速度， 粒子的遷移率在一定條件下決定于粒子本身的性質(zhì)即其所帶電荷及大小和形狀。 u＝ v/E=q/6πrη v=QX /6πrη 在具體實驗中 ， 移動速度 V為單位時間 t（ 單位為 s） 內(nèi)移動的距離 d（ 單位為 cm） ， 即 V＝ d/t。 電場強度 X為單位距離 L（ 單位為 cm） 內(nèi)電勢差 E（ 單位為伏特 ） ， 即 X＝ E/L。 將這兩個公式代入上述公式 ， 得到 U=v/X=dL/Et d=u*Et/L 由此可以得到兩種物質(zhì)移動距離的差為 △ d=(dAdB)=(uAuB)Et/L 從這個公式可以看出物質(zhì)能否進行分離決定于二者的遷移率 。 影 響 因 素 1. 待分離大分子的性質(zhì) ： 所帶的電荷、分子大小和形狀，分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快 2. 緩沖液 pH和離子強度 ： pH值距離其等電點愈遠，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大 ；但是 pH過高或過低引起蛋白變性，緩沖液通常要保持一定的離子強度；強度過低，則緩沖能力差，不易維持 PH恒定，離子強度過高，在待分離分子周圍形成較強的帶相反電荷的離子擴散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使
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