電泳技術(shù)方王楷ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 上槽注入 5%H3PO4， 下槽注入 2%NaOH，檢查凝膠管上下口內(nèi)有無氣泡 ，如有必須排除。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一 pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢相等，成為兼性離子，凈電位為零，此時(shí)溶液的 pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。 4 、定量 1 ） 取 6 支試管并編號 ， 分別 加入 N 氫 氧 化 鈉 4 ml 。將染色后的區(qū)帶分別剪開，將其溶與堿液，進(jìn)行比色測定，計(jì)算各區(qū)帶的百分?jǐn)?shù)。 按 支持介質(zhì)形狀 不同可分為： ⑴ 薄層電泳 ； ⑵ 板電泳 ； ⑶ 柱電泳 聚丙烯酰胺電泳（ PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠由單體丙稀酰胺和 N, N’ 甲叉雙丙烯酰胺在加速劑和催化劑 （ 四 甲基 乙 二 胺 ， T E M E D ） 作用下交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 電場強(qiáng)度 X為單位距離 L（ 單位為 cm） 內(nèi)電勢差 E（ 單位為伏特 ） ， 即 X＝ E/L。電泳（ electrophoresis） 電泳的基本原理 帶電的膠?；虼蠓肿釉谕饧与妶鲋?， 向帶相反電荷的電極作定向移動的現(xiàn)象稱為電泳 。 將這兩個(gè)公式代入上述公式 ， 得到 U=v/X=dL/Et d=u*Et/L 由此可以得到兩種物質(zhì)移動距離的差為 △ d=(dAdB)=(uAuB)Et/L 從這個(gè)公式可以看出物質(zhì)能否進(jìn)行分離決定于二者的遷移率 。 具有如下優(yōu)點(diǎn)： 1 、 一定濃度下，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好 2 、 化學(xué) 性能 穩(wěn)定 ， 與 被 分離 物 不起 化學(xué) 反應(yīng) 3 、 對 pH 和 溫度 變化 較 穩(wěn)定 4 、 幾乎 無 電滲 作用 ， 樣品 分離 重復(fù) 性 較好 5 、 樣品 不易 擴(kuò)散 ， 用量 少 ， 靈敏 度 可 達(dá) 10－ 6g 6 、 凝膠 孔徑 可 調(diào)節(jié) 7 、 分辨 率 高 ， 尤其 在 不 連續(xù) 凝膠 電泳 中 不連續(xù)凝膠電泳的分離原理： 1 、樣品的濃縮效應(yīng) 1 ）凝膠層的不連續(xù)性 2 ）緩沖液離子成分的不連續(xù)性 2 、電荷效應(yīng) 各種蛋白質(zhì)所帶電荷不同，有效遷移率也不同 3 、分子篩效應(yīng) 凝膠濃度不同，網(wǎng)孔徑大小不同。 實(shí)驗(yàn)操作步驟及注意點(diǎn) 1 、
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