電泳技術(shù)方王楷ppt課件(完整版)
【正文】 將針頭插入凝膠與水之間，使針頭慢慢螺旋前進(jìn)。 c 立即用 5ml注射器配針頭注入約 ，垂直放置（ 將長滴管及時(shí)清洗 ） 注意：丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺是神經(jīng)毒劑，對皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸。 等 電 聚 焦 電 泳 不同物質(zhì)由于帶電性質(zhì)不同，因而在一定的電場強(qiáng)度下移動(dòng)的方向和速度不同 ,可以進(jìn)行分離。 3 、染色 電泳結(jié)束，將膜放入氨基黑 10B 染色， 3min 后取出， 漂洗，反復(fù)幾次，至背景漂凈為止。電泳結(jié)束后，將醋酸纖維膜置于染色液。當(dāng)需要增大電場強(qiáng)度以縮短電泳時(shí)間時(shí)，需附有冷卻裝置 4. 電滲 ： 在 電場中液體對固體支持物的相對移動(dòng)；當(dāng)電滲方向與電泳方向一致時(shí)，會(huì)加快顆粒泳動(dòng)速度，反之，當(dāng)兩者方向相反時(shí)，會(huì)減慢顆粒泳動(dòng)速度。 F＝ QX ? 質(zhì)點(diǎn)的前移同樣要受到阻力（ f ）的影響，對于一個(gè)球形質(zhì)點(diǎn)，服從 Stoke定律，即： f ＝ 6π r ην（ r為質(zhì)點(diǎn)半徑， η為介質(zhì)粘滯系數(shù)， ν為質(zhì)點(diǎn)移動(dòng)速度） ? 當(dāng)質(zhì)點(diǎn)在電場中作穩(wěn)定運(yùn)動(dòng)時(shí)： F＝ f 即： QX＝ 6π rην 遷移率 u：單位電場強(qiáng)度下的電泳速度， 粒子的遷移率在一定條件下決定于粒子本身的性質(zhì)即其所帶電荷及大小和形狀。 由于混合物中各組分所帶電荷性質(zhì) 、 電荷數(shù)量以及分子量的不同 ， 在同一電場的作用下 ， 各組分泳動(dòng)的方向和速度也各異 。一般所用離子強(qiáng)度為 。 影響因素： 1 、聚丙烯酰胺凝膠孔徑的大小 2 、緩沖系統(tǒng) 3 、離子強(qiáng)度 血 清 蛋 白 醋 酸 纖 維 薄 膜 電 泳 目的： 原 理： 血清蛋白在 ，分子大小、形狀各有差異。 2 ） 用點(diǎn)樣器蘸血清少許（ 不能看見有液滴形成 ），按在 點(diǎn)樣處（點(diǎn)樣要與膜邊緣垂直，且大小均勻）。 5 、 計(jì)算 總 吸 光 度 光 密度 總和 T ＝ A ＋ α 1 ＋ α 2 ＋ β ＋ γ 各 部分 蛋白 質(zhì) 的 百分?jǐn)?shù) ： 蛋白質(zhì) ％ ＝ A / T
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