《電泳技術(shù)方王楷》ppt課件-文庫(kù)吧
2025-04-16 18:13 本頁(yè)面
【正文】 電泳速度減慢。一般所用離子強(qiáng)度為 。 3. 電場(chǎng)強(qiáng)度 ： 過高 ，產(chǎn)熱，樣品和 Buffer擴(kuò)散增加，條帶增寬；蛋白變性。 過低 ，電泳時(shí)間增加，擴(kuò)散。當(dāng)需要增大電場(chǎng)強(qiáng)度以縮短電泳時(shí)間時(shí)，需附有冷卻裝置 4. 電滲 ： 在 電場(chǎng)中液體對(duì)固體支持物的相對(duì)移動(dòng)；當(dāng)電滲方向與電泳方向一致時(shí)，會(huì)加快顆粒泳動(dòng)速度，反之，當(dāng)兩者方向相反時(shí)，會(huì)減慢顆粒泳動(dòng)速度。 5. 支持介質(zhì)的篩孔 ： 篩孔越小，則顆粒在移動(dòng)的過程中所受到的阻力也就越大 分 類 按 支持介質(zhì) 的不同可分為： ⑴ 紙電泳（ Paper electrophorisis） ⑵ 醋酸纖維薄膜電泳（ Cellulose Acetate electrophoresis） ⑶ 瓊脂凝膠電泳（ Agar Gel electrophoresis） ⑷ 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ Polyacrylamide Gel electrophoresis）（ PAGE） ⑸ SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDS－ PAGE）。 按 支持介質(zhì)形狀 不同可分為： ⑴ 薄層電泳 ； ⑵ 板電泳 ； ⑶ 柱電泳 聚丙烯酰胺電泳（ PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠由單體丙稀酰胺和 N, N’ 甲叉雙丙烯酰胺在加速劑和催化劑 （ 四 甲基 乙 二 胺 ， T E M E D ） 作用下交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 具有如下優(yōu)點(diǎn)： 1 、 一定濃度下，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好 2 、 化學(xué) 性能 穩(wěn)定 ， 與 被 分離 物 不起 化學(xué) 反應(yīng) 3 、 對(duì) pH 和 溫度 變化 較 穩(wěn)定 4 、 幾乎 無(wú) 電滲 作用 ， 樣品 分離 重復(fù) 性 較好 5 、 樣品 不易 擴(kuò)散 ， 用量 少 ， 靈敏 度 可 達(dá) 10－ 6g 6 、 凝膠 孔徑 可 調(diào)節(jié) 7 、 分辨 率 高 ， 尤其 在 不 連續(xù) 凝膠 電泳 中 不連續(xù)凝膠電泳的分離原理： 1 、樣品的濃縮效應(yīng) 1 ）凝膠層的不連續(xù)性 2 ）緩沖液離子成分的不連續(xù)性 2 、電荷效應(yīng) 各種蛋白質(zhì)所帶電荷不同，有效遷移率也不同 3 、分子篩效應(yīng) 凝膠濃度不同，網(wǎng)孔徑大小不同。分子量和構(gòu)型不同的蛋白
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