《電泳技術(shù)方王楷》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 以聚丙烯酰胺作為支持物，兩性電解質(zhì)（ A m p h o l i n e ）在支持物內(nèi)形成穩(wěn)定的 pH 梯度，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在電場力的作用下，便會在支持物中運(yùn)動到相當(dāng)于自身 pH 梯度中聚合成一狹窄的區(qū)帶而停留。 清 蛋白 泳 動 最 塊 ， 其 余 依次 α α β 、 γ 球 蛋白 。 2 ） 剪 下 各 條 蛋白 帶 和 在 膜 空白 部位 剪 一條 帶 （ 空白 帶 的 寬 度 以 最 窄 的 條帶 為 準(zhǔn) ， why ？ ） ， 將 各 條 帶 浸 入 試管 ， 不時 搖動 ， 洗 脫 藍(lán)色 。通電，電壓 100V, 時間 1 h 。 實驗操作步驟及注意點 1 、 準(zhǔn)備與點樣 1 ） 將已充分浸透的醋酸纖維膜取出，用濾紙吸去多余的 緩沖液。 A、 α α β 、 γ 五條區(qū)帶。 具有如下優(yōu)點： 1 、 一定濃度下，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好 2 、 化學(xué) 性能 穩(wěn)定 ， 與 被 分離 物 不起 化學(xué) 反應(yīng) 3 、 對 pH 和 溫度 變化 較 穩(wěn)定 4 、 幾乎 無 電滲 作用 ， 樣品 分離 重復(fù) 性 較好 5 、 樣品 不易 擴(kuò)散 ， 用量 少 ， 靈敏 度 可 達(dá) 10－ 6g 6 、 凝膠 孔徑 可 調(diào)節(jié) 7 、 分辨 率 高 ， 尤其 在 不 連續(xù) 凝膠 電泳 中 不連續(xù)凝膠電泳的分離原理： 1 、樣品的濃縮效應(yīng) 1 ）凝膠層的不連續(xù)性 2 ）緩沖液離子成分的不連續(xù)性 2 、電荷效應(yīng) 各種蛋白質(zhì)所帶電荷不同，有效遷移率也不同 3 、分子篩效應(yīng) 凝膠濃度不同，網(wǎng)孔徑大小不同。 過低 ，電泳時間增加，擴(kuò)散。 將這兩個公式代入上述公式 ， 得到 U=v/X=dL/Et d=u*Et/L 由此可以得到兩種物質(zhì)移動距離的差為 △ d=(dAdB)=(uAuB)Et/L 從這個公式可以看出物質(zhì)能否進(jìn)行分離決定于二者的遷移率 。 ? 在電場中，推動帶電質(zhì)點運(yùn)動的力（ F）等于質(zhì)點所帶
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1